трусики женские украина

На головну

 Каріотип людини - Медичні науки

Зміст.

Введение..................................................................................................... 1

Глава 1. мітотичним хромосоми ............................................. .............. 2

Глава 2. Мейотіческіе хромосоми ............................................. .............. 5

Глава 3. Цитогенетичний метод ............................................. ............... 13

Глава 4. Статевий хроматин ............................................. ....................... 20

Глава 5. Мозаїцизм .............................................. ................................... 23

Введення.

Одним з ключових питань генетики людини є питання про будову і функціонування матеріальних основ спадковості. Відомості по кожному з трьох рівнів організації спадкових структур (генному, хромосомному, геномному) накопичуються в останні роки з дивовижною швидкістю, і можна сподіватися, що недалеко той час, коли буде складено досить цілісна картина спадковості людини. Уже й зараз з цього питання людини можна віднести до числа найкращим чином вивчених об'єктів поряд з дрозофіли, мишею, кукурудзою. [1]

Для правильного розуміння значення спадковості в патології людини необхідно мати докладні відомості за трьома частково взаємопов'язаним розділами:

1) за морфологічним і хімічній будові хромосом і каріотипу в цілому; 2) за дискретним ознаками людини, контрольованим одиничними генами («інвентаризація» одиниць спадкової мінливості); 3) за «архітектоніці» генів в хромосомах (зчеплення генів і карти хромосом). По кожному з цих розділів накопичено багато даних, їх інтенсивна розробка триває як в теоретичному, так і прикладному (клінічному) аспектах.

Принципи та основні розділи загальної цитогенетики сформувалися протягом 20-х і 30-х років в основному завдяки дослідженням, проведеним на дрозофілі і деяких рослинах. Цітогепетіка людини і ссавців, що займає провідне місце в современой цитогенетиці, розвинулася пізніше, головним чином у зв'язку з методичними труднощами.

Історію розвитку цитогенетики людини можна розділити на три періоди. Перший охоплює період з минулого століття до середини 50-х років і має зараз суто історичний інтерес. Це були пошуки методичних підходів до отримання препаратів хромосом людини чудовими своєю наполегливістю і працьовитістю цитологами того часу (А. Г. Андрес, 1934). Хоча нашими цитогенетики А. Г. Андресом і М. С. Навашиним були правильно описані перші 10 пар великих хромосом, однак не було достовірно встановлено навіть загальне число хромосом в клітинах людини. Невідомою залишалася також їх морфологія.

Другий період, початок якому було покладено роботою Tjio і Levan в 1956 р, характеризувався виникненням і бурхливим розвитком сучасної цитогенетики людини. Досить швидко були розроблені всі основні методичні прийоми хромосомного аналізу, отримані фундаментальні відомості про каріотипі людини, про основні особливості будови і функціонування його нормальних хромосом. Саме в цей період зародилася медична цитогенетика, яка відкрила нову область патології людини, зумовлену зміною числа або структури хромосом.

Третій період розвитку цитогенетики людини почався в 70-х роках. Його по праву можна вважати початком сучасного етапу в розвитку науки про цитологічних основи спадковості людини. Ряд методичних нововведень забезпечили перехід цитогенетики на якісно інший рівень. Реалізувалася можливість вивчення індивідуальності хромосом людини і навіть їх ділянок. Це відразу підняло на новий рівень медичну цитогенетику. Стало можливим досліджувати комплексно морфологію, функцію, хімічні особливості будови і надмолеку-лярні організацію хромосом людини. Розвиток в ці ж роки методів генетичного картування хромосом людини забезпечив рішення самої складної задачі - створення генетичних карт хромосом.

Таким чином, сучасна цитогенетика людини являє собою багату фактичним матеріалом, розгалужену самостійну область генетики людини. В даний час завдання ідентифікації всіх елементів людського каріотипу при аналізі на стадії мітозу вирішена на основі застосування диференціальних забарвлень хромосом.

Хромосоми як індивідуальні структури стають доступними для дослідження після значного укорочення і потовщення, які вони відчувають у період підготовки клітини до поділу. Для соматичних клітин таким поділом є мітоз, для генеративних - спочатку мітоз, а потім мейоз.Глава 1. мітотичним хромосоми.

Основні відомості про хромосомному наборі людини в цілому і про індивідуальні хромосомах отримані в результаті вивчення хромосом в метафазі мітозу. На цій стадії мітозу чітко видно, що диплоїдний набір хромосом людини складається з 46 елементів: 22 пар аутосом і однієї пари статевих хромосом (XX у жінок і XY у чоловіків). На стандартно забарвлених препаратах форма метафазних хромосом визначається місцем розташування первинної перетяжки, яка формується завдяки деконденсаціі функціонуючого в метафазі центромерного району. В окремих хромосомах можуть існувати додаткові перетяжки, звані вторинними. У разі локалізації такий перетяжки на кінці хромосоми відокремлюваний нею дистальний ділянка хромосоми називається супутником.

За формою і загальними розмірами всі аутосоми людини легко підрозділяються на 7 груп, що позначаються латинськими літерами від А до G (рис. 8). Крім цього, всі аутосоми в порядку зменшення загальної довжини нумеруються (від 1 до 22).

Довжина однієї і тієї ж хромосоми в мітозі значно варіює, оскільки і в стадії метафази триває процес природної конденсації хромосоми, який значно посилюється колхіцином. Тому для ідентифікації служить показник відносної, а не абсолютної довжини хромосоми. Однак його надійність обмежується тим, що хромосоми володіють різною довжиною, а в даній хромосомі плечі різних розмірів скорочуються неоднаково: вкорочення довших відбувається швидше в порівнянні з короткими. Це не відбивається на зазначеній вище груповий характеристиці, але перешкоджає ідентифікації близьких за розміром і формою хромосом усередині груп. Труднощі в індивідуальній ідентифікації хромосом посилюються також тим, що диференціальна конденсація може мати місце і між гомологічними хромосомами, обумовлюючи гетероморфізм гомологів. В даний час потреба у використанні методу морфометрії і обумовлених з її допомогою лінійних параметрів хромосоми фактично відпала у зв'язку з введенням в практику хромосомного аналізу диференціальних забарвлень хромосом. [2]

Аналіз спонтанних вторинних перетяжок, включаючи спутнічной, помітно не полегшує розпізнавання окремих хромосом. З їх допомогою найбільш регулярно можна виділити аутосому 9, часто володіє значною перетяжкою в околоцентромерном районі довгого плеча. Спутнічной перетяжкою володіють всі десять акроцентріческіх хромосом людини, a D- або G-хромосоми за цією ознакою в межах груп не розрізняються.

Морфологічна однорідність хромосоми по довжині, як вона вимальовується при мікроскопічному вивченні метафазних хромосом на рутинно приготовлених і забарвлених препаратах, насправді виявляється оманливою. Методичний прогрес у цитогенетики людини і вищих еукаріотів в цілому, який мав місце протягом останніх 15-20 років, призвів до відкриття глибокої лінійної диференційованості хромосоми у відношенні і структури, і функції. Ця диференційованість, індивідуальна для кожної хромосоми, порівняно легко виявляється в метафазі мітозу. Завдяки цьому в сучасній цитогенетики людини можна ідентифікувати всі хромосоми не по окремим і випадковим ознаками, а по істотних сторонам їх структурно-функціональної організації. У практиці цитогенетичного аналізу з цією метою .ісследуют диференціальну конденсацію хромосом, хронологію реплікації ДНК в хромосомах або диференціальну окрашиваемость хромосом (А. Ф. Захаров, 1977).

Диференціальну конденсації ділянок хромосоми - одна з істотних її характеристик, найбільш повно виражена в інтерфазних ядрі. У природних умовах перебігу мітозу хромосомні ділянки, різко розрізняються за ступенем конденсації в період інтерфази, в метафазі виглядають практично однаково. Лише при спеціальних способах світловий або електронної мікроскопії вдається виявити неоднорідну лінійну структуру зовні гомогенної метафазної

хромосоми (Bahr, Larsen, 1974). Вирівнювання циклів конденсації в різних ділянках хромосом можна загальмувати штучно. З цією метою особливо успішно застосовується 5-бромдезоксіурідіна (А. Ф. Захаров, 1973, 1977;

Dutrillaux, Lejeune, 1975). У присутності цієї речовини хромосоми вступають в метафазу нерівномірно ущільненими по своїй довжині. В результаті ретельного вивчення їх морфології показано, що кожна хромосома людини має строго постійне і специфічне чергування нормально і слабо конденсованих ділянок і за цією ознакою може бути ідентифікована.

Внутріхромосомная асинхронність реплікації ДНК є другою найважливішою рисою лінійної неоднорідності хромосоми, яка може бути виявлена ??в метафазі мітозу. Протягом півтора десятків років ця риса хромосомної організації була доступна вивчення методом радиоавтографии хромосом (за ред. А. А. Прокоф'євої-Бельговской, 1969; А. Ф. Захаров, 1977; Giannelli, 1970, 1974). На основі цього методу були розкриті принципові закономірності репродукції хромосом людини, серед яких асинхронність репродукції різних ділянок хромосоми, сталість і специфічність порядку репродукції для даної хромосоми є найважливішими. Однак ідентифікацію індивідуальних хромосом радіоавтографія просунула менше, ніж цього очікували. На радіоавтографах додатково вдається розрізнити аутосоми 4 і 5, 13, 14 і 15, 17 і 18. У жіночих клітинах одна з двох Х-хромосом відрізняється пізнім початком і пізнім закінченням синтезу ДНК. Незважаючи на обмеженість даних, одержуваних методом радиоавтографии, цей прийом виявився винятково корисним у поліпшенні ідентифікації аномалій вказаних хромосом і допоміг у виділенні кількох нових самостійних синдромів у хромосомної патології.

Істотний прогрес у вивченні послідовності синтезу ДНК по довжині кожної хромосоми людини в нормі, її взаємозв'язку з іншими характеристиками хромосомної організації, її стану у випадках чисельних або структурних змін в хромосомному наборі відбувається в даний час завдяки використанню в якості попередника синтезу ДНК аналога тимідину - 5- бромдезоксіурідіна. Ослаблена здатність до фарбування ділянок хромосоми, які включили цей попередник, озброїла цитогенетиків точним методом вивчення хронології хромосомної репродукції, можливості якого лімітуються лише роздільною здатністю світлової мікроскопії. Репликационная структура всіх хромосом людини виявляється з граничною ясністю, і вона може бути описана в чітких морфологічних термінах.

Кожна хромосома складається з ділянок, реплицирующихся в різний час. Мається чітке чергування районів з ранньої та пізньої реплікацією. У метафазної хромосомі

такі ділянки добре помітні за допомогою світлового мікроскопа. Специфічність репликационной структури кожної хромосоми складається з індивідуальності розмірів, числа і взаємного розташування розрізняються хромосомних районів (рис. 9).

На відміну від викладених вище двох феноменів нерівномірного фарбування хромосом по довжині, викликаного включенням в ДНК 5-бромдезоксіурідіна, під диференціальної окрашиваемость хромосом мається на увазі здатність до виборчого фарбування по довжині хромосоми, що не модифікованої прижиттєво будь-якими впливами. Диференціальне фарбування хромосом в цьому випадку забезпечується порівняно простими температурно-сольовими впливами на фіксовану хромосому.

Важливо відзначити, що при всій різноманітності подібних обробок хромосомних препаратів після фіксації і застосовуваних флуорохромних або нефлуоресцірующіх барвників що виявляється лінійна неоднорідність хромосоми завжди одна й та ж. Її малюнок змінюється тільки залежно від ступеня ущільненості хромосоми: у більш довгих, слабкіше скорочених хромосомах стає помітною подальша неоднорідність тих сегментів, які виглядали гомогенно пофарбованими в сильно конденсованих хромосомах. Диференціальне фарбування може спостерігатися або по всій довжині хромосоми (Q-, G- і R-сегменти), або в її центромерного районі (С-сегменти).

Найбільш чітке уявлення про малюнок диференціального фарбування хромосом по всій довжині можна отримати при фарбуванні препаратів по G-методикою, використовуючи барвник Гімзи (рис. 10). На таких препаратах хромосоми виглядають поперечно покресленими, по-різному пофарбованими сегментами («banding»). Малюнок кожної пари хромосом є специфічним для неї. Розміри сегментів неоднакові. У дрібних хромосомах груп F і G малюнок утворюється одиничними сегментами, у великих хромосомах їх багато. Загальна кількість забарвлених і нефарбованих сегментів в нормальному хромосомному наборі середнього ступеня конденсації, відповідно до Паризької номенклатурою, так само 322. У прометафазних хромосомах їх число збільшується до 1000 і більше.

На Паризькій конференції по номенклатурі в цитогенетиці людини була розроблена і в даний час увійшла в практику цитогенетичного аналізу система позначення сегментів нормальних хромосом і хромосом, які зазнали тим чи іншим структурним перебудовам (Paris Conference, 1971). На рис. 11 наведено приклад цієї системи для аутосоми 1.

Незалежно від того, як вирішується питання про природу диференціальної окрашиваемости хромосом, засновані на цьому феномені цитологічні карти мають виняткове значення для розвитку цитогенетики людини. З їх допомогою вдається віднести генетичні маркери не просто до того чи іншого хромосомному плеча, а до певного району хромосоми. У медичній цитогенетики стало реальним виявлення походження аномальних хромосом аж до точного опису районів.

Другий вид диференціального фарбування хромосом розкриває специфічність околоцентромерних районів в хромосомах людини. У різних хромосомах розміри С-сегментів різні, вони особливо великі в аутосомах 1, 9 та 16. Проте ідентифікувати з цієї забарвленням схожі за розміром і формою хромосоми не вдається. В Y-хромосомі З-хроматин локалізується в дистальної частини довгого плеча. В одній і тій же хромосомі у різних індивідів його зміст може разлічаться.Глава 2. Мейотіческіе хромосоми.

Мейоз об'єднує серію різних процесів, в ході яких первинні зародкові клітини диференціюються в зрілі статеві клітини. На початку цієї серії сперматогонії (оогонии) перетворюються на первинні сперматоціти (ооцити). Центральною подією є перший мейотическое розподіл сперматоцита (ооцита), в ході якого хромосоми відчувають особливо складні специфічні перетворення в період профази. Перша мейотіческіх профаза розділяється, як відомо, на п'ять стадій: лептотене, зіготене, пахітене, діплотене і діакінеза. На відміну від мітозу, профази якого в цитогенетичному аналізі практично не використовується, профазних хромосоми першого мейотичного поділу представляють дуже великий інтерес для Цитогем-нетікі людини. Метафазні хромосоми першого мейотичного поділу, що є бівалент гомологічниххромосом, являють собою менш диференційовані структури в порівнянні з метафазних мітотичними хромосомами. Хромосоми другого мейотичного поділу майже не використовуються в цитогенетики людини.

Протікання мейозу в чоловічому та жіночому організмі значно різниться в декількох відносинах: період онтогенезу, тривалість окремих фаз, морфологія мітотичних перетворень.

У чоловіків мейотіческіе поділу починаються в період статевого дозрівання і протікають безперервно протягом всього наступного статевозрілого стану. Цей процес на відміну від жіночого мейозу не носить циклічного характеру. У сім'яниках одночасно дозріває велика кількість гамет, тому гонади статевозрілого чоловіки можуть служити джерелом мейотіческі діляться клітин в будь-який момент. На хромосомних препаратах одночасно вдається бачити різні мейотіческіе фігури, від сперматогоніальних метафаз до ме-тафаз другого мейотичного поділу. Тривалість перетворень від сперматогоний до сперматозоїдів займає близько 8-9 тижнів. Тривалість окремих стадій дуже різна, тому клітини різних стадій зустрічаються з неоднаковою частотою. Найбільш важливі для цитогенной-тичного аналізу стадії пахітени і діакінеза зазвичай представлені достатнім числом клітин. [3]

У жіночому організмі мейоз протікає в два етапи, розділених великим проміжком часу. Перший етап, який включає формування оогоній і проходження першого мейотичного поділу, проходить в ембріональних яєчниках. До моменту народження дівчинки в яєчниках все оогоній диференційовані ооцити, а останні пройшли стадії лептотени - пахітени і зупинилися в стадії діплотени. Перебування в цій стадії, що отримала назву діктіотени, триває весь постнатальний період життя жінки. Подальший розвиток клітини зі стадії діктіотени в зрілу яйцеклітину відбувається циклічно, по одній клітці щомісяця, і закінчується овуляцією. Викладене пояснює, чому ранні стадії першого мейотичного поділу у жінки можна аналізувати лише в ранньому ембріональному періоді, а наступні стадії в звичайних умовах вивченню недоступні.

Основні відомості з організації мейотіческіх хромосом людини отримані при вивченні клітин сім'яників. Можна виділити наступні аспекти цих досліджень.

Аналіз лінійної структури індивідуальних хромосом. Характерною особливістю структури мейотіческіх хромосом, вираженою переважно на перших стадіях профази мейозу, є їх хромомерное будову (рис. 12). З даних по цитології мейотіческіх хромосом деяких видів рослин добре відома індивідуальність хромомерное будови кожної хромосоми («Цитологія і генетика мейозу» В. В. Хвостовий і Ю. В. Богданова, 1975). На жаль, індивідуальні біваленти в хромосомному наборі людини, як чоловічому, так і жіночому, можна виділити лише у пізній пахітене, коли вони значно скорочені і хромомерное їх будови істотно втрачена. Проте в результаті декількох спроб пахітене аналізу хромосом отримані перші відомості про морфологію бівалентов акроцентріческіх і деяких інших хромосом (за ред. А. А. Прокоф'євої-Бельговской, 1969; Hungeriord, 1973).

В ідентифікації пахітенних бівалентов з певним успіхом застосовані С-і Q-методи диференціальної забарвлення (Goetz, 1975). Виявлено повний збіг між малюнками G-фарбування і хромомерним будовою пахітенних хромосом, а також між малюнками пофарбованих за G-методом мейотіческіх і мітотичних хромосом (Luciani ea, 1975).

Хромосомная ко?югація та освіта хіазм. Дослідження діакінеза - метафази I мейозу в клітинах чоловіків показало, що гомологичная ко?югація є обов'язковою для всіх хромосом людини, включаючи короткі. У тому чи іншому біваленте є від 1 до 6 хіазм; за даними різних авторів, їх загальна кількість на хромосомний набір коливається від 35 до 66 (Ford, 1973). Розподіл хіазм в індивідуальних бівалентах стало можливим аналізувати після того, як кожен бівалент вдалося ідентифікувати на основі послідовної фарбування по Q- і С-техніці (Hulten, 1974). За даними Hulten (1974), середня частота хіазм в індивідуальних аутосомах пропорційна довжині хромосоми. На неї не впливають чисельні або структурні порушення в інших хромосомах. Мабуть, хіазми формуються в певних районах кожної хромосоми. З'ясування числа та локалізації хіазм в кожній хромосомі має важливе значення при їх генетичному картуванні.

Ідентифікація хромосомних аномалій. Явище ко?югаціі гомологічниххромосом в мейозі використовується для ідентифікації багатьох хромосомних перебудов, які зачіпають лінійну структуру хромосоми. Делеции, вставки, інверсії, реципрокні транслокації, дупліка-ції призводять до зміни конфігурації бивалента. Виникають уніваленти, тріваленти і т. Д. У поєднанні з аналізом мітотичних хромосом дослідження морфології мейотіческіх хромосом в пахітене, діакінезе і мета-фазі I неодноразово проводилося у випадках чисельних або структурних змін аутосом, статевих хромосом у чоловіків з безпліддям (А. А. Прокоф'єва -Бельговская і В. К. Борджадзе, 1971; Kjessler, 1966; Hulten, 1974, та ін.). Субмікроскопічна або надмолекулярна організація хромосомного апарату вивчена зовсім недостатньо. Якщо про будову хромосоми на рівні світлової мікроскопії і про молекулярній будові спадкового матеріалу в даний час накопичена велика інформація, то проміжні ступені ультраструктурному організації хромосоми залишаються в основному невідомими. Немає поки ніяких фактичних передумов ставити питання про можливу специфіку ультраструктурному організації генетичного апарату людини.

Найбільш цінну інформацію про тонку структурі функціонуючих хромосом принесло дослідження політенних хромосом, які є специфічною, але природною моделлю хромосом інтерфазних ядра в клітинах двокрилих, і хромосом типу «лампових щіток», обнаруживающихся в ооцитах амфібій в мейотической профазе I. Великі розміри цих хромосом дозволили провести ретельне їх вивчення під світловим мікроскопом. В результаті цих досліджень сформульовані положення, які розглядаються як принципові для організації хромосом еукаріотів в цілому (І. І. Кикнадзе, 1972).

У інтерфазних ядрі хромосомні райони, відповідні еухроматин, мають хромомерное будову. Кожна хромомери є структурною і функціональною одиницею хромосоми як поздовжньо диференційованої органели. Диференціальна транскрипція цих одиниць структурно забезпечується деконденсація упакованого в ній дезоксірібонуклеопротеіда, що виражається у формі пуфів в політенних хромосомах, або петель в хромосомах типу «лампових щіток».

Методом дослідження тонкої структури інтерфазних ядер, що не володіють Політенія, а також метафазних хромосом є електронна мікроскопія (Ю. С. Ченцов, В. Ю. Поляков, 1974). На жаль, на підставі результатів, отриманих цим методом, поки не вдалося скласти цілісного уявлення про ультраструктури інтерфазних ядра. На електронограммах ультратонких зрізів основна обнаруживаемая морфологічна одиниця - це нитка в різних перетинах діаметром 10 нм і менше. На препаратах хроматину, розпластується на поверхні водного меніска, виявляються протяжні нитки близько 23-25 ??нм в діаметрі.

Незважаючи на численні дослідження мітотичних або мейотіческіх хромосом, дані щодо їх ультраструктури, які дозволили б створити несуперечливу модель упаковки елементарної хромосомної нитки під час клітинного поділу, залишаються мізерними. Найбільша інформація отримана за ультраструктурі спеціалізованих районів хромосом: центромерного району, ядерця, сінаптонемального комплексу в мейотіческпх хромосомах. Дані електронної мікроскопії цілих ізольованих хромосом використані для їх ідентифікації, при цьому спеціальну увагу приділено метафазних хромосомами людини (Bahr, Larsen, 1974). Цей метод дозволив виявити нерівномірне щільність упаковки елементарних хромосомних ниток по довжині хромосом, і малюнок цієї нерівномірності виявився збігається з лінійною діфференцірованностио структури хромосоми, що виявляється під світловим мікроскопом. Елементарні фібрили на електронограммах цілих розпластаних хромосом мають розмір близько 25-30 нм. Біохімічне дослідження таких фібрил і відповідні розрахунки дають підставу зробити висновок, що молекули нуклеопротеїдів знаходяться в них в сверхскрученном стані і що, крім гістонів, фібрили містять інші білки.

Досить повне висвітлення питань молекулярної генетики та хромосомної організації в численних спеціальних монографіях і посібниках (С. Є. Бреслер, 1973; І. П. Ашмарин, 1974; Г. Стент, 1974, та ін.) Виключають необхідність докладного розгляду цих питань у даній книзі. Порівняно новий молекулярний аспект хромосомної організації виник у зв'язку з розробкою методів фракціонування тотальної ДНК генома по повторюваності східних нуклеотидних послідовностей і методів гібридизації нуклеїнових кислот на хромосомних препаратах. Ці методи відкрили можливість з'ясування локалізації різних фракцій ДНК в хромосомному наборі. Важливими знахідками, отриманими в цій новій області, прикордонної між молекулярної і цитологічної генетикою, були: а) виявлення в геномі еукаріотів, крім ДНК з унікальними послідовностями, великої частки ДНК з однаковими або близькими послідовностями нуклеотидів, що повторюються багато сотні і тисячі разів (Г. П. Георгієв, 1973; С. А. Лімборський, 1975); б) виявлення нерівномірного локалізації ДНК з різними характеристиками в хромосомному наборі: ДНК з найбільшою кількістю повторюваних послідовностей локалізується в гетерохроматинових районах хромосом.

До теперішнього часу фракціонування ДНК і визначення хромосомної локалізації фракцій проведено на багатьох видах організмів. Кожен вид характеризується своєю специфічною структурою геному відносно складу ДНК і специфікою їх розподілу по хромосомах набору. Багато роботи цього напрямку виконано на клітинах людини. Отримані в них результати підсумовано А. Ф. Захаровим (1977) і Jones (1973).

ДНК генома людини може бути фракціонований на ДНК з унікальними копіями (близько 64%) і ДНК з повторюваними послідовностями. За швидкістю ренатурації, яка відображає повторюваність нуклеотидних послідовностей, остання фракція може бути підрозділена на ДНК з малою (13,4%), проміжної (12,3%) і високою (10,3%) швидкістю ренатурації молекул ДНК. Таким чином, в геномі людини близько 10% всієї ДНК має високу багаторазовість повторення однакових послідовностей.

Методом градієнтного ультрацентрифугирования в групі ДНК з високою повторюваністю послідовностей виділені принаймні чотири типи так званих сателітних ДНК. Крім цих видів ДНК, в експериментах з гібридизацією ДНК - РНК досліджена хромосомна локалізація ДНК, що кодує синтез 5S, 18S і 28S Хвороби. В даний час розподіл різних типів ДНК в хромосомах людини вимальовується такий спосіб.

ДНК з низькою і проміжної повторюваністю нуклеотидних копій виявляється у всіх хромосомах, причому вона локалізується по всій довжині їх плечей.

ДНК з високою повторюваністю нуклеотидних копій виявляється переважно в околоцентромерних і частково теломерна районах. Сателітні індивідуальні ДНК розподілені в різних хромосомах нерівномірно. Так, сателітної ДНК I і IV особливо багата Y-xpoмосома, в хромосомах 1 і 16 найбільше міститься сателітної ДНК II, а в хромосомі 9 - III. Рибосомная ДНК 18S і 28S укладена майже виключно в коротких плечах всіх 10 акроцентріческіх хромосом. Дистальна частина довгого плеча аутосоми 1 - переважне місце для пістронов, що кодують 5S РНК. Не виключена можливість, що методом гібридизації ДНК з РНК in situ вдасться картировать не тільки полігенні ло-куси, але також структурні гени, що повторюються мале число разів (Rotterdam. Conference, 1974).

Дві найважливіші риси генетичної організації еукаріотів - диференціальна активність структурних генів і велика частка генів, що регулюють цей процес, - повинні мати основою відповідну структурну організацію хромосоми. Десятиліття наполегливої ??праці цитогенетиків значно наблизили нас сьогодні до розуміння того, як в хромосомі взаємодіють структура і функція, як хромосома здійснює свою складну роль інтеграції системи генів.

Перша фундаментальна риса структурно-функціональної організації хромосоми полягає в існуванні двох різних функціональних типів хромосомного матеріалу - еухроматину і гетерохроматина. Їх основна відмінність полягає в транскрипционной активності.

Відсутність генетичної активності у гетерохроматину обумовлено або його бідністю структурними генами (структурний гетерохроматин), або тимчасовим виключенням ділянки хромосоми, що несе такі гени, з генетичної транскрипції (факультативний гетерохроматин, гетерохроматінізація).

Другою найважливішою рисою хромосомної організації є лінійна розчленованість хромосоми па ділянки, що складаються з хроматину різного типу. Кожна хромосома відрізняється своїм унікальним порядком розташування гетеро- і еухроматінових районів.

Підрозділами хроматину з генетичного значенням добре корелює з відмінностями типів хроматину і по ряду інших характеристик: станом конденсації в інтерфазних ядрі і хронології конденсації в митотическом і мейотичному циклі; часу реплікації ДНК;

відношенню до фарбування флуорохромами або нефлуоресцірующіх барвниками; чутливості до шкідлива дія хімічних мутагенів; хімічним особливостям ДНК і, очевидно, білків, що входять до складу хроматину; фенотипическим проявам хромосомних перебудов. Для гетерохроматина характерні конденсована стан в інтерфазних ядрі, що випереджає конденсація в профазі мітозу і мейозу, можливість відставати в конденсації спонтанно або під впливом деяких впливів у метафазі мітозу. У порівнянні з еухроматин гетерохроматіновие райони хромосом репродукується в більш пізні відрізки S-періоду. При диференціальної забарвленні за G- і С-методикою гетерохроматіновие сегменти зберігають здатність до фарбування (G-сегменти) і навіть посилено фарбуються (С-сегменти). У цитогенетиці добре відома нерівномірність розподілу по довжині хромосоми її структурних ушкоджень, індукованих мутагенними речовинами: підвищеної пошкоджуваність відрізняються саме гетерохроматіновие райони. ДНК з неодноразово повторюваними нуклеотидними послідовностями характерна саме для гетерохроматину. На відміну від еухроматину, що містить унікальні гени, дисбаланс по яких негативно відбивається на фенотипі організму, зміни в кількості гетерохроматину не впливають або значно менше впливають на розвиток ознак організму.

Взаємопов'язаність різних структурних та функціональних характеристик хромосоми - третя фундаментальна риса хромосомної організації. Питання про причинно-наслідкових зв'язках у зазначеному кореляційному комплексі активно досліджується. Відповідь має бути отриманий, зокрема, на питання про те, зводиться чи все розмаїття властивостей різних видів хроматину до відмінностей в хімічних особливості хромосомної ДНК. Однак незалежно від прогресу в розумінні цих кореляцій їх феноменологія служить головним інструментом пізнання структурно-функціональної розчленованості кожної конкретної хромосоми людини. У поздовжньої диференційованості індвідуальних хромосом по щільності конденсації, по окрашиваемости тими чи іншими барвниками, за особливостями складової їх ДНК та іншим характеристикам закладені не формальні ознаки ідентифікації хромосом або їх ділянок, а ознаки, що мають генетичний сенс. Ця нова область цитогенетики людини активно розвивається, і в поєднанні з успіхами в картуванні хромосом підніме цитогенетику людини на ще більш високий рівень. З вже наявних з цієї проблеми відомостей інтерес для генетики представляють наступні.

Гетерохроматин, окрашивающийся за методикою С-забарвлення, виявляється у всіх хромосомах людини і називається структурним гетерохроматином. У всіх аутосомах і Х-хромосомі він займає, як у більшості хромосом інших біологічних видів, околоцентромерний район. В Y-хромосомі він локалізується в дистальної частини довгого плеча. У різних хромосомах кількість С-гетерохроматину різне. Особливо великі його блоки, що поширюються переважно на довгі плечі, містяться в аутосомах 1, 9 і 16; саме ці райони відомі як найбільш регулярних вторинних перетяжок. Особливо дрібні блоки цього хроматину спостерігаються в аутосоме 2 і в Х-хромосомі. У акроцентріческіх хромосомах гетерохроматин поширюється на короткі плечі.

Мабуть, у різних хромосомах околоцентромерний гетерохроматин неоднаковий, що випливає з низки фактів. Ця різнорідність виявляється вже по різному оптимуму часу і рН лужного діапазону, що застосовується в техніці С-забарвлення, при яких С-хроматин з'являється в різних хромосомах. Неоднорідність особливо демонстративна при фарбуванні хромосом акрихіном або акрихін-іпритом: С-гетерохроматин аутосом 1, 9 і 16 абсолютно не флуоресціює, а гетерохроматин аутосом 3, 4, акроцентріческіх хромосом і Y-хромосоми світиться надзвичайно яскраво. Генетичне значення різнорідності С-гетерохроматину людини поки не ясно. Хімічна основа цієї різнорідності починає прояснюватися. Експериментами з гібридизацією ДНК з РНК на цитологічних препаратах встановлено, що відмінності гетерохроматину різних хромосом людини можуть бути пов'язані з особливостями структури ДНК. У всіх випадках це ДНК з повторюваними нуклеотидними послідовностями, однак у різних хромосомах містяться, очевидно, різні класи ДНК. Так, з добре охарактеризованих сателітних ДНК сателіти I і IV у великій кількості містяться в Y-хромосомі, сателіт II - в гетерохроматин аутосоми 1 і 16, сателіт III - в гетерохроматин аутосоми 9. Структурний гетерохроматин акроцентріческіх хромосом - основний носій рибосомной ДНК.

У повній відповідності з даними загальної цитогенетики про слабкий негативний вплив дисбалансу по гетерохроматіновие матеріалу на розвиток організму знаходяться відомості про існування в людській популяції значного поліморфізму, обумовленого розмірами околоцентромерних гетерохроматина. Особливо сильно варіює зміст структурного гетерохроматину З-типу в аутосомах 1, 4, 9, 13-15, 16, 21-22 і Y-хромосомі. Відсутність фенотипічних відхилень від норми у більшості носіїв таких каріотіпіческіх варіантів дозволяє розглядати їх як варіанти норми. Однак ця проблема поставлена ??на порядок денний зовсім недавно. Вона вимагає ретельних досліджень на великому популяційному матеріалі, перш ніж будуть намічені обгрунтовані межі хромосомної норми, за межами якої для організму стає не байдужим дисбаланс і по гетерохроматину.

Є багато підстав розглядати хромосомні райони, позитивно забарвлюються по G-методикою, як різновид структурного гетерохроматину. На користь цього подання, крім відношення до барвників, свідчать пізня реплікація цих районів, утворення ними хромомер в профазних мейотіческіх хромосомах, здатність відставати в мітотичної конденсації під впливом 5-бромдезоксіурідіна або холоду. Важливо відзначити, що дисбаланс по аутосомам, особливо багатим G-забарвлюється хроматином, тягне за собою виникнення найменш тяжких аномалій розвитку для індивіда - носія такого дисбалансу. Так, саме до цієї категорії хромосомних аномалій відносяться трисомії 13, 18 і 21. Є повідомлення і про те, що ДНК із середньою повторюваністю однакових нуклеотидних послідовностей локалізується в G-окрашивающихся сегментах хромосом.

Питання, які стоять перед цитогенетикою людини щодо структури, локалізації і особливо генетичного значення структурного гетерохроматину, порівняно нові.

Прогрес у їх вирішенні не можна відокремити від прогресу в розшифровці природи гетерохроматину у еукаріотів в цілому.

Крім структурного гетерохроматину, існує ф а-культатівнимі гетерохроматин, поява якого в хромосомі обумовлено гетерохроматінізаціей еухроматіческіх районів при особливих умовах. Є достовірні докази існування цього явища в хромосомах людини на прикладі генетичної інактивації однієї з Х-хромосом в соматичних клітинах жінки. У людини та інших ссавців це окремий випадок явища, вперше відкритого на дрозофілі Muller в 1932 р і отримав назву «компенсації дози гена». Для ссавців його сутність полягає в еволюційно сформованому механізмі інактивації другої дози генів, локалізованих в Х-хромосомі, завдяки чому, незважаючи на неоднакове число Х-хромосом, чоловічий і жіночий організми за кількістю функціонуючих генів зрівняні.

Сформульована Lyon (1961, 1974) відповідна гіпотеза, що отримала її ім'я, складається з трьох основних положень:

1. У соматичних клітинах нормального жіночого організму одна з двох Х-хромосом инактивирована.

2. У різних клітинах організму інактивується або материнська, або батьківська Х-хромосома.

3. Інактивація відбувається в ранньому ембріональному періоді і стійко зберігається за даною Х-хромосомою в клітинних поколіннях.

Гіпотеза Lyon заснована на великому числі генетичних і цитологічних фактів, у тому числі отриманих на людині, які за роки з моменту її висунення безперервно поповнювалися і відомості про яких можна знайти в ряді оглядів (А. Ф. Захаров, 1968; Lyon, 1972, 1974 ; Ghan-dra, Brown, 1975, та ін.).

Генетичні факти засновані на тому, що у гетерозигот по зчепленим з Х-хромосомою ознаками виявляються дві клітинні популяції. В одній з них проявляється дія гена материнської Х-хромосоми, в іншій - батьківській, що пов'язано з інактивацією батьківського або материнського алелей відповідно. При формулюванні своєї гіпотези Lyon спиралася на випадки мозаїчної забарвлення вовняного покриву мишей, що обумовлювалося інактивацією в різних ділянках тіла або дикого гена, або його мутантного аллеля. У людини грунтовні докази існування в організмі гетерозиготних жінок двох популяцій клітин, в кожній з яких инактивирован один з двох алелей гена, локалізованого в Х-хромосомі, отримані при вивченні ефектів генів глюкозо-6-фосфатдегідрогенази, фосфогліцераткинази, гипоксантин-фосфорібозілтрансферази, еритроцит-тарної групи крові Xg (а), при вивченні зчеплених з Х-хромосомою агамаглобулінемії і мукополисахаридоза (синдром Хантера), гемофілії. У гетерозигот по електро-форетічеського варіантам глюкозо-6-фосфатдегідрогенази підтверджено, що у людини Х-хромосома інактивується в ранньому ембріональному періоді (Migeon, Kennedy, 1975). Ці висновки необхідно мати на увазі при інтерпретації даних по спадкових хвороб, зчепленим з Х-хромосомою, особливо у монозиготних близнюків.

Цитологічні докази на користь гіпотези Lyon також вельми переконливі і полягають у тому, що в нормальних жіночих соматичних клітинах одна з двох Х-хромосом відповідає характеристикам гетерохроматінізірованной хромосоми. У інтерфазних ядрі вона виявляється у вигляді так званого тільця Барра (Х-хроматину) - щільно конденсованої, інтенсивно забарвлюється грудочки хроматину. У профазі ця хромосома випереджає в циклі конденсації свого гомолога - другу Х-хромосому. В умовах експериментального впливу холодом або 5-бромдезоксіурідіна одна з Х-хромосом значно відстає в конденсації, не відрізняючись у цьому відношенні від структурного гетерохроматину аутосом 1, 9, 16 і Y-хромосоми. Друга Х-хромосома є однією з найбільш запізнілих по початку і закінчення реплікації ДНК.

Дослідження численних випадків аномалій в системі Х-хромосом у людини показує, що явище компенсації дози генів поширюється також на всі випадки порушень в числі Х-хромосом, залишаючи в соматичній клітині лише одну Х-хромосому в активному стані. Особливо демонстративні в цьому відношенні Х-полісоміі, коли число інактивованих Х-хромосом дорівнює числу наявних у клітці за вирахуванням однієї генетично функціонуючої.

Як було показано вище, відомості про каріотипі людини постійно поглиблюються, і дослідження все більше Проводяться на молекулярному рівні. Цитологічне вивчення матеріальних основ спадковості людини добре доповнюється генетичним аналізом дискретних прізнаков.Глава 3. Цитогенетичний метод.

У генетиці людини використовуються різноманітні методи дослідження, застосовувані і в інших розділах біології - генетики, фізіології, цитології, біохімії та ін. Антропогенетіка своєму розпорядженні також власними методами дослідження: цитогенетичним, блізнецовим, генеалогічним та ін. [4]

Досягненнями молекулярної біології та біохімії внесений великий внесок у розвиток генетики. В даний час біохімічним і молекулярно-генетичним методам дослідження належить провідна роль в генетиці людини та медичної генетики. Однак і класичні методи генетики людини, такі як цитогенетичний, генеалогічний та блізнецовий, мають істотне значення в даний час, особливо в питаннях діагностики, медико-генетичного консультування та прогнозування потомства.

Ознайомимося з можливостями цитогенетичного методу.

Суть цього методу полягає у вивченні будови окремих хромосом, а також особливостей набору хромосом клітин людини в нормі та патології. Зручним об'єктом для цього служать лімфоцити, клітини епітелію щоки та інші клітини, які легко отримувати, культивувати і піддавати каріологіческій аналізу. Це важливий метод визначення статі і хромосомних спадкових захворювань людини.

Основою цитогенетичного методу є вивчення морфології окремих хромосом клітин людини. Сучасний етап пізнання будови хромосом характеризується створенням молекулярних моделей цих найважливіших структур ядра, вивченням ролі окремих компонентів хромосом в зберіганні і передачі спадкової інформації.

У розділі 1 ми розглянули такі компоненти хромосом, як білки і нуклеїнові кислоти. Тут же коротко зупинимося на будові і морфології хромосом.

Будова хромосом.

Хромосомну теорію спадковості створив американський учений Т. Г. Морган. Провівши велику кількість досліджень на плодової мушці дрозофілі, Морган і його учні установили, що саме в хромосомах знаходяться відкриті Менделем фактори спадковості, які були названі генами. Т. Морган і його учні показали, що гени розташовані лінійно по довжині хромосоми.

Після того як було доведено, що хромосоми є основними генофором (носіями генів), почався період їх найбільш інтенсивного вивчення. Успіхи молекулярної біології і генетики дозволили зрозуміти деякі закономірності будови і функціонування хромосом прокаріотів і еукаріотів, проте багато що тут залишається ще невідомим. В останні роки хромосоми еукаріотів, особливо людини, стають предметом вивчення різних фахівців, починаючи від генетиків і кінчаючи фізиками.

В даний час встановлено, що в основі будови хромосоми лежить хроматин - складний комплекс ДНК, білків, РНК та інших речовин, що входять в хромосому (будова хроматину ми докладно розглянули в розділі 1). Передбачається, що в хромосому людини входить одна гігантська молекула ДНК, молекули РНК, гістони і кислі білки, різні ферменти, фосфоліпіди, метали Са2 +, Mg2 + і деякі інші речовини. Спосіб укладання і взаємного розташування молекул цих хімічних сполук у хромосомі поки не відомий. Довга нитка ДНК не може розташовуватися в хромосомі безладно. Існує припущення, що нитка ДНК упакована закономірним чином і пов'язана з білками.

Ф. Аррігі і співавтори (1971) встановили, що унікальні послідовності займають більше 56% ДНК хромосом людини, високоповторяющіеся - 12,4%, проміжні повтори - 8%. Загальна кількість повторюваних генів в ДНК хромосоми людини одно 28%. Число хромосом у людини тривалий час залишалося нез'ясованим. Справа в тому, що визначити кількість хромосом у ссавців, особливо у людини, було важко. Хромосоми виявилися маленькими, дуже численними, погано піддавалися підрахунку. При фіксації клітини вони зливалися в грудки, що ускладнювало визначення істинного числа хромосом. Тому перші дослідники не могли точно і правильно підрахувати кількість хромосом в клітинах людини. Називалося різну кількість хромосом - від 44 до 50.

Зазвичай хромосоми в клітинах спостерігають під час мітозу на стадії метафазної пластинки. У інтерфазних ядрі хромосоми в світловий мікроскоп не видні. У 1912 р Г. Винивартера, вивчаючи хромосоми в сперматогоний і оогониях статевих залоз людини, вилучених під час операції, встановив, що чоловічий набір хромосом (каріотип) містить 47 хромосом, а жіночий - 48. У 1922 р Т. Пайнтер повторив дослідження Винивартера і встановив, що чоловічий і жіночий каріотипи містять по 48 хромосом, але жіночий відрізняється від чоловічого тільки двома хромосомами. У жінок знаходиться 2 великі статеві хромосоми, а у чоловіка одна велика Х-хромосома і одна маленька К-хромосома. У наступні роки цю точку зору підтримували й інші вчені. П. І. Живаго і А. Г. Андреа (1932) запропонували першу класифікацію хромосом в залежності від їх довжини. Так як хромосоми дуже близько розташовуються одна біля іншої і їх дуже важко досліджувати, то і в наступні роки точне число хромосом у людини служило предметом суперечок і дискусій. Однак поступово було досягнуто згоди між дослідниками з цього питання, і протягом 30 років більшість цитогенетиків вважало, що у людини диплоидное число хромосом одно 48, а гаплоидное - 24. Вдосконалені методи вивчення хромосом дозволили отримати більш точні відомості про кількість хромосом в клітинах у людини , а також виявити аномалії нормального каріотипу, відповідальні за деякі каліцтва. Особливо плідним виявилися два методи:

1. Обробка культури клітин алкалоїдом колхіцином, який веде до накопичення клітин, які діляться на стадії метафази;

2. Обробка клітин слабкими розчинами солей, що викликають набухання, расправление хромосом, що полегшує їх дослідження.

У 1956 р шведські цитологи Дж. Тійо і А. Леван виготовили культури клітин з тканин легенів, узятих у абортованих людських ембріонів і, використовуючи удосконалену методику обробки клітин, отримали надзвичайно чіткі препарати, в яких ясно було видно 46 хромосом. [5]

Кількома місяцями пізніше Ч. Форд і Дж. Хаммертон в Англії встановили, що диплоїдні попередники статевих клітин в сім'яниках чоловіків (сперматогонії) також мають по 46 хромосом, а гаплоїдні (сперматоціти 1-го поділу) - по 23 хромосоми.

Після цього були вивчені багато клітин з різних органів і тканин людини і скрізь нормальне число хромосом виявилося рівним 46.

Жіночий каріотип відрізняється від чоловічого тільки однієї статевою хромосомою. Решта 22 пари однакові у чоловіків і жінок. Ці 22 пари хромосом називаються аутосомами. Нормальний каріотип складається з 44 аутосом (22 пари) і двох статевих хромосом - XX у жінок і XY у чоловіків, т. Е. Жіночий каріотип має дві великі статеві хромосоми, а чоловічий - одну велику і одну маленьку.

У статевих клітинах людини знаходиться одинарний (гаплоїдний) набір хромосом - 23, а в соматичних клітинах - подвійний (диплоїдний) набір - 46. Ці відкриття стимулювали подальше вивчення хромосом. Були розроблені методи дослідження хромосом в культурі лімфоцитів периферичної крові та на інших об'єктах. В даний час хромосоми відносно легко досліджують у лімфоцитах периферичної крові. Венозну кров поміщають в спеціальну живильне середовище, додають фітогемаглютинін, який стимулює клітини до поділу, і поміщають на 72 ч. В термостат. За 6 ч. До кінця інкубації сюди додають колхіцин, який затримує процес ділення клітин на стадії метафазної пластинки. Потім культуру поміщають в гіпотонічний розчин NaCl, в якому клітини набухають, що призводить до легкого розриву оболонок ядра і переходу хромосом в цитоплазму. Після цього препарати забарвлюють ядерними барвниками, зокрема ацетоорсеіном, і розглядають їх в світловому мікроскопі з іммерсіей.

Під мікроскопом враховують загальну кількість хромосом, фотографують їх, потім з фото вирізують ножицями кожну хромосому і наклеюють на чистий аркуш паперу в ряд, починаючи від найбільшої (першої) хромосоми і закінчуючи самої маленької (двадцять другий) і статевої Y-хромосомою. Люмінесцентна методика дозволяє швидко і просто проводити масові дослідження з метою виявлення хворих з різними типами хромосомних аномалій. Сукупність кількісних (кількість хромосом і їх розміри) і якісних (морфологія хромосом) ознак диплоїдного набору одиничної клітини позначається терміном «каріотип». Будова хромосом змінюється залежно від стадії поділу клітин (профази, метафази, анафази, телофази).

Уже в профазі мітозу видно, що хромосома утворена двома взаємно переплітаються нитками однакового діаметра - хроматидами. У метафазі хромосома вже спіраль, і дві її хроматиди лягають паралельно, розділені вузькою щілиною. Кожна хроматида складається з двох полухроматід. В результаті мітозу хроматиди материнської хромосоми стають сестринськими хромосомами, а полухроматіди - їх хроматидами. В основі хроматид лежать хромонеми - так називають більш тонкі нитки ДНП, що складаються з білка і нуклеїнових кислот.

В інтерфазі (проміжок між двома поділами клітин) хроматин тісно пов'язаний з ядерними мембранами і ядерним білковим матриксом. Він утворює також великі ділянки деспіралізованние ниток ДНП. Потім поступово хроматин спіралізуются, утворюючи типові метафазниехромосоми. Розміри їх варіюють від 2 до 10 мікрон.

В даний час інтенсивно досліджуються структурні особливості аутосом і статевих хромосом (на клітинах кісткового мозку, лімфоцитах, фібробластах, клітинах шкіри, регенерує печінки).

У хромосомах виявлено структури, названі хромомери. Хромомер - це спирализованную ділянку хромонеми. Проміжки між хромомери представлені хромонемнимі нитками. Розташування хромомери на кожній хромосомі строго фіксоване, спадково детерміноване.

Хромомер - порівняно велика генетична одиниця, порівнянна по довжині з хромосомою кишкової палички. Будова і функція хромомери - основна загадка сучасної генетики. Припускають, що деякі хромомери - це один генетичний локус, де є один структурний ген і багато генів регуляторних. Можливо, в інших хромомери розташовується кілька структурних генів.

Хромонеми і хромомери оточені неокрашіваемие речовиною - матриксом. Вважають, що матрикс містить дезоксирибонуклеїнову і рибонуклеїнової кислоти, білки.

Певні ділянки хромосом утворюють ядерця. Ядерця - це більш-менш деспіралізованние ділянки хромосом, оточені продуктами діяльності генів (рибосоми, частинки РНК і т. П.). Тут йде синтез рибосомальної РНК, а також здійснюються певні етапи формування рибосом. У ньому синтезується велика частина РНК клітини.

У метафазної хромосомі розрізняють ще кілька утворень: центромеру, два плеча хромосоми, теломери і супутник.

Центромерного (meros - по-грецьки, частина) ділянка хромосоми - це неокрашіваемие розрив у хромосомі, видимий на препараті хромосом. Центромера містить 2-3 пари хромомер, має складну будову. Припускають, що вона спрямовує рух хромосоми в мітозі. До Центромера прикріплюються нитки веретена.

Теломери - спеціальні структури на кінцях хромосом - також мають складну будову. До їх складу входить кілька хромомер. Теломери запобігають концевое приєднання метафазних хромосом один до одного. Відсутність теломеров робить хромосому «липкою» - вона легко приєднується до інших фрагментів хромосом.

Одні ділянки хромосоми називаються еухроматінових, інші - гетерохроматіновие. Еухроматіновие райони хромосом - це генетично активні ділянки, вони містять основний комплекс функціонуючих генів ядер. Втрата навіть найдрібнішого фрагмента еухроматину може викликати загибель організму. Гетерохроматіновие райони хромосом - зазвичай сильно спіралізують і, як правило, генетично мало активні. У гетерохроматин знаходиться ядерцевих організатор. Втрата навіть значної частини гетерохроматина часто не приводить організм до загибелі. Гетерохроматіновие ділянки хромосоми реплицируются пізніше, ніж еухроматіновие. Слід пам'ятати, що еухроматин і гетерохроматин - це не речовина, а функціональний стан хромосоми.

Якщо розташувати фотографії гомологічниххромосом у міру зростання їх розмірів, то можна отримати так звану ідіограмма кариотипа. Таким чином, ідіограмма - це графічне зображення хромосом. На ідіограмма пари гомологів розташовуються рядами в порядку спадної розміру.

У людини на ідіограмма серед 46 хромосом розрізняють три типи хромосом в залежності від положення в хромосомі центромер:

1. метацентричної - центромера займає центральне положення в хромосомі, обидва плеча хромосоми мають майже однакову довжину;

2. субметацентріческіе - центромера розташовується ближче до одного кінця хромосоми, в результаті чого плечі хромосоми різної довжини.

 Класифікація хромосом людини за розміром і розташуванням центромера

 Група хромосом Номер по каріотипу Характеристика хромосом

 А (1) 1,2,3 1 і 3 майже метацентріческая і 2-крупна субметацентріческіе

 В (11) 4,5 великі субакроцентріческіе

 С (III) 6-12 середні субметацентріческіе

 A (lV) 13-15 середні акроцентріческіе

 E (V) 16-18 дрібні субметацентріческіе

 F (VI) 19-20 найдрібніші мегацентріческіе

 G (VII) 21-22 найдрібніші акроцентріческіе

 Х-хромосома (відноситься до III групи 23 середня майже метацентрична

 Y-хромосома 23 дрібна акроцентріческіе

3. акроцентріческіе - центромера знаходиться у кінця хромосоми. Одне плече дуже короткий, інше довге. Хромосоми не дуже легко відрізняти одну від іншої. Цитогенетики з метою уніфікації методів ідентифікації хромосом на конференції в 1960 р в м Денвері (США) запропонували класифікацію, що враховує величину хромосом і розташування центромер. Патау в тому ж році доповнив цю класифікацію і запропонував розділити хромосоми на 7 груп. Відповідно до цієї класифікації, до першої групи А відносяться великі 1, 2 і 3 суб-і акроцентріческіе хромосоми. До другої групи В - великі субметацентріческіе пари 4-5. До третьої групи С відносяться середні субакроцентріческіе (6-12 пари) і Х-хромосома, яка за величиною знаходиться між 6 і 7 хромосомами. До групи Д (четвертої) відносяться середні акроцентріческіе хромосоми (13, 14 і 15 пари). До групи Е (п'ятий) - дрібні субметацентріческіе хромосоми (16, 17 і 18 пари). До групи F (шостий) дрібні метацентріческая (19 і 20 пари), а до групи G (сьомий) - найдрібніші акроцентріческіе хромосоми (21 і 22 пари) і дрібна акроцентріческіе статева Y-хромосома (табл. 4).

Існують і інші класифікації хромосом (Лондонська, Паризька, Чиказька), в яких розвинені, конкретизовані і доповнені положення Денвера класифікації, що в кінцевому підсумку полегшує ідентифікацію та позначення кожної з хромосом людини та їх частин.

Акроцентріческіе хромосоми IV групи (Д, 13-15 пари) і групи VII (G, 21-22 пари) на короткому плечі несуть маленькі додаткові структури, так звані сателіти. У деяких випадках ці сателіти є причиною зчеплення хромосом між собою при діленні клітин в мейозі, внаслідок чого відбувається нерівномірний розподіл хромосом. В одній статевій клітині виявляється 22 хромосоми, а в іншій - 24. Так виникають моносомії і трисомії по тій чи іншій парі хромосом. Фрагмент однієї хромосоми може приєднатися до хромосомі іншої групи (наприклад, фрагмент 21 або 22 приєднується до 13 або 15). Так виникає транслокация. Трисомія 21-ї хромосоми або транслокація її фрагмента є причиною хвороби Дауна.

Усередині семи цих груп хромосом на підставі лише зовнішніх відмінностей, видимих ??в простій мікроскоп, провести ідентифікацію хромосом майже неможливо. Але при обробці хромосом акрихін притому і за допомогою ряду інших методів забарвлення їх можна ідентифікувати. Відомі різні

способи диференціальної забарвлення хромосом по Q-, G-, С-техніці (А. Ф.Захаров, 1973) (рис. 27). Назвемо деякі методи ідентифікації індивідуальних хромосом людини. Широко застосовуються різні модифікації так званого методу Q. Наприклад, метод QF - з використанням флюорохромів; метод QFQ - з використанням акрихіну; метод QFH - з використанням спеціального барвника фірми «Хекст» № 33258, що виявляє повторювані послідовності нуклеотидів в ДНК хромосом (сателітну ДНК і т. п.). Потужним засобом вивчення та індивідуальної характеристики хромосом є модифікації тріпсінового методу GT. Назвемо, наприклад, GTG-метод, що включає обробку хромосом трипсином і забарвлення барвником Гімза, GTL-метод (обробка трипсином і забарвлення по Лейтманна).

Відомі методи з обробкою хромосом ацетатно солями і барвником Гімза, методи з використанням гідроокису барію, акрідіноранжа та інші.

ДНК хромосом виявляється за допомогою реакції Фельгена, забарвлення метиловим зеленим, акрідіноранжем, барвником № 33258 фірми «Хекст». Акрідіноранжевий барвник з ДНК однонитчатим утворює димерні асоціати і дає червону люмінесценцію, з двунитчатой ??спіральної ДНК утворює одномірні асоціати і люминесцирует зеленим світлом.

Вимірюючи інтенсивність червоної люмінесценції, можна судити про кількість вільних місць у ДНП і хроматині, а ставлення зелена - червона люмінесценція - про функціональної активності хромосом.

Гістони і кислі білки хромосом виявляються при різних рН забарвленням бромфенодовим синім, зеленим міцним, сріблення, іммунолюмінесцентним методом, РНК - забарвленням галлюціаніновимі квасцами, барвником фірми «Хекст» № 1, акрідіноранжем при нагріванні до 60 °.

Широко застосовуються електронна мікроскопія, гістоавторадіографія і ряд інших методів.

У 1969 р шведський біолог Т. Касперссон і його співробітники показали, що хромосоми, забарвлені гірчичним акрихіном і освітлені під мікроскопом Найбільш довгохвильової частиною ультрафіолетового спектра, починають люминесцировать, причому одні ділянки хромосом світяться яскравіше, інші слабкіше. Причина цього - різний хімічний склад поверхні хромосоми. У наступні роки дослідники виявили, що кінці Y-хромосоми людини світяться яскравіше будь-який інший хромосоми людини, тому Y-хромосому легко помітити на препараті.

Акріхініпріт переважно зв'язується з ГЦ-парами ДНК. Флюоресцируют окремі диски гетерохроматинових ділянок. Видаляють ДНК - світіння зникає. Складені карти флюоресцирующих хромосом. З 27 видів ссавців тільки у людини, шимпанзе, горили і орангутанга світяться Y-хромосоми. Світіння пов'язано з повторами генів, які з'явилися в еволюції 20 млн. Років тому.

Отже, в нормі в соматичних клітинах людини знаходиться 46 хромосом (23 пари), а в статевих - 23 хромосоми, по одній хромосомі кожної пари. При злитті сперматозоїда і яйцеклітини в зиготі кількість хромосом подвоюється. Таким чином, кожна соматична клітина організму людини містить один набір батьківських хромосом і один набір материнських хромосом. Якщо у людини 46 хромосом, то у різних мавп число хромосом одно 34, 42, 44, 54, 60, 66.

При дії ультразвуку або високого тиску можна домогтися розриву ниток ДНК, які входять до складу хромосоми, на окремі фрагменти. Підігріваючи розчини ДНК до температури 80-100 °,

можна викликати денатурацію ДНК, розбіжність двох складових її ниток. За певних умов роз'єднані нитки ДНК можуть знову реассоцііровать в стійку двунитчатую молекулу ДНК (реассоціаціі або ренатурація ДНК). Денатурацію і ренатурації ДНК можна отримати і на препаратах фіксованих хромосом, обробляючи їх відповідним чином. Якщо після цього хромосоми забарвити барвником Гімза, то в них виявляється чітка поперечна смугастість, що складається з світлих і темних смуг. Розташування цих смуг в кожній хромосомі різне. Таким чином, по «Гимза-дискам» можна також ідентифікувати кожну з 23 пар хромосом.

Цими та іншими методиками, особливо гибридизацией соматичних клітин різних тварин і людини, користуються для картування хромосом, т. Е. Для визначення положення різних генів в тій чи іншій хромосомі. В даний час в аутосомах і статевих хромосомах людини картіровано близько 200 генів.

На кінець 1975 було локалізовано наступну кількість генів у різних хромосомах людини (А. Ф. Захаров, 1977): 1 хромосома - 24 гена; 2 хромосоми - 10, 3-2, 4-3, 5-3, 6-14, 7-4, 8-1, 9-8, 10-5, 11-4, 12-10, 13-3, 14 -3, 15-6, 16-4, 17-14, 18-1, 19-4, 20-3, 21-4, 22-1; Y-хромосома - 2; Х-хромосома - 95 генов.Глава 4. Статевий хроматин.

У 1949 р М. Барр і Ч. Бертрам, вивчаючи нейрони кішки, звернули увагу на те, що в інтерфазних ядрі клітини міститься інтенсивно забарвлюються тільце, причому воно присутнє тільки в ядрах клітин самок і відсутній у самців. Воно було знайдено у багатьох тварин і завжди тільки у особин жіночої статі. Це тільце отримало назву статевого хроматину, або тільця Барра. У ряду хребетних і у людини воно з'являється в ранньому онтогенезі на стадії гаструли, але раніше розвитку гонад (статевих залоз). На локалізацію, форму і структуру статевого хроматину не впливають статеві гормони, отже, він не є вторинним статевим ознакою. Між числом тілець статевого хроматину і числом X-хромосом в ядрі є прямий зв'язок. Статевий хроматин в інтерфазних ядрах обумовлений спирализация однією з Х-хромосом, інактивація якої є механізмом, вирівнюючим баланс генів статевих хромосом в клітинах самців і самок (т. Е. Це один з механізмів дозової компенсації генів). [6]

У 1961 р кілька дослідників одночасно висловили припущення, що одна з Х-хромосом у нормальних жінок щодо не активна в генетичному відношенні. У 1961 році англійська дослідниця М. Лайон висунула гіпотезу про механізми інактивації однієї з Х-хромосом клітин жіночого організму. Основні положення цієї гіпотези наступні:

1. Одна з двох Х-хромосом клітин жінки неактивна.

2. Неактивна хромосома може бути батькового або материнського організму.

3. Інактивація відбувається в ранньому ембріогенезі і зберігається під час подальшого розмноження і розвитку клітинної лінії. Цей процес інактивації Х-хромосоми в ряду поколінь звернемо:

XX * -> - УХ -> XX * і т. Д. (Тут зірочкою позначена спіралі-зовано Х-хромосома). Такий тип оборотних змін генетичного матеріалу португальська генетик Серра запропонував називати трепціей (від грец. Treptos - зміна).

Спіралізує Х-хромосома в клітці утворює статевий хроматин або тільце Барра. Якщо у жінок в ядрі клітини кілька Х-хромосом, то в клітинах кілька тілець Барра, активної залишається лише одна Х-хромосома. Х-хромосома інактивується не вся, частина короткого плеча залишається генетично активною. Інактивація Х-хромосоми в певній мірі залежить від стадії клітинного циклу та фізіологічного стану організму. За наявністю зайвого або відсутності тільця Барра можна диагносцировать деякі види спадкових захворювань (наприклад, синдром Клайнфельтера, синдром Шерешевського - Тернера). Клітини, що не містять статевий хроматин (хроматин-негативні клітини), виявляються у індивідуумів, що мають набір хромосом 45, ХО (синдром Шерешевського - Тернера);

46, XY (нормальні чоловіки); 47, XYY (синдром Клайнфельтера з двома Y-хромосомами). Зазвичай в клітинах нормального чоловічого організму зустрічається деяка кількість псевдотелец Барра (конденсованих ділянок аутосом) і спіраль Y-хромосом, тому при діагностиці різних хромосомних захворювань необхідно вміти відрізняти ці утворення від типового статевого хроматину, утвореного спіраль зайвої Х-хромосомою. Тільце Барра виявляється при хромосомному наборі 46, XX (нормальні жінки); 47, ХХУ і 48, ХХУУ (класичний синдром Клайнфельтера). Два тільця Барра виявляються у людини, що має три Х-хромосоми, (47, XXX); три Х-хромосоми і одну У (48, ХХХУ, синдром Клайнфельтера); 49, ХХХУУ (синдром Клайнфельтера). Три тільця Барра зустрічаються при каріотипі 48, ХХХХ і 49, ХХХХУ (важкий синдром Клайнфельтера).

У поліплоїдних клітинах число тілець статевого хроматину відповідає плоїдності. За формулою Гарднера, число тілець Барра (В)

одно В = Х -, де Х - число Х-хромосом, Р - ступінь плоїдності клітини. У неполіплоідних клітинах число тілець статевого хроматину дорівнює числу Х-хромосом мінус одиниця (В = Х - 1).

Структурні зміни хромосом

Хромосоми можуть піддаватися різним структурним змінам. Особливо важливе значення мають втрата окремих фрагментів хромосом (поділу) або перенесення ділянки однієї хромосоми на іншу (транслокація). Транслокація позначається латинською буквою /, в дужках поруч з нею пишуть індекс групи або номер хромосоми-донора, позначення стерпного ділянки. Ці ж позначення вказуються для хромосоми-реципієнта, наприклад 46, XXt (Ср + + В4q -). У дужках літерами р і q вказують плечі хромосом, які поставлені транслокацією. Коротке плече хромосоми позначають буквою р, довге - буквою q, супутник - буквою s, і т. Д. Збільшення довжини плеча позначається знаком плюс, а зменшення - знаком мінус (обидва вони ставляться після символу хромосоми).

Поява однієї зайвої хромосоми в каріотипі призводить до трисомії. Кратне збільшення числа всіх хромосом носить назву поліплоїдії (можуть бути Триплоїд, тетраплоїди і т. Д.). Втрата однієї з пари гомологічних хромосом призводить до стану, який називається моносомією. Зміни числа або будови хромосом називається хромосомними абераціями.

Розглянемо найбільш часті види структурних порушень хромосом - делеции і транслокації. При делеции загальна кількість хромосом не змінено. Проте в якийсь хромосомі бракує генетичного матеріалу, що викликає різні зміни фенотипу. Найчастіше зустрічається делеція 5-й і 18-й аутосом і Х-хромосоми. Делеции призводять до розвитку різних спадкових захворювань і синдромів.

У 1963 р Ж. Лежен описав синдром «котячого крику». Крик таких дітей нагадує «нявкання кішки». У дітей різке недорозвинення гортані, кругле місяцеподібне обличчя, мікроцефалія, микрогнатия, монголоїдної розріз очей, низько розташовані деформовані вушні раковини, м'язова гіпотонія, слабо виражені вторинні статеві ознаки. Ці діти розумово відсталі. У каріотипі дітей відзначається делеция короткого плеча 5-ї пари хромосом.

Ділення довгого і короткого плеча 18-ї хромосоми супроводжується різними порушеннями будови обличчя, скелета, внутрішніх органів. У дітей відзначається розумова відсталість, гіпотрофія, гіпотонія, мікроцефалія, недорозвинення особи, низький грубий голос, недорозвинення зовнішніх статевих органів, середнього вуха, атрезія зовнішнього слухового проходу та інші аномалії.

При делеции короткого плеча 18-ї хромосоми у хворих також відзначаються різні дефекти з боку скелета, внутрішніх органів і розумова відсталість.

Делеція короткого плеча Х-хромосоми може трактуватися як часткова моносомія за Х-хромосомі. Описана у жінок, у яких спостерігається затримка росту, недорозвинення яєчників без важких соматичних аномалій. Хоча статевий хроматин у них виявляється, проте його розміри значно менше, ніж в нормі.

При хронічний мієлолейкоз відзначається скорочення короткого плеча 21-ї хромосоми (так звана філадельфійська хромосома). Однак ця хромосома виявляється тільки в клітинах крові і пунктате кісткового мозку. Інші ж клітини мають нормальний каріотип.

В результаті двох кінцевих недостач з подальшим з'єднанням розірваних кінців утворюються кільцеві хромосоми. Тому дане порушення структури хромосом фактично є окремим випадком делеции. Клінічна картина хворих - носіїв кільцевих хромосом - нагадує таку при делеции відповідної хромосоми. Так, при кільцевої хромосомі групи В (5-а пара) розвивається клінічна картина синдрому «котячого крику», а при кільцевої Х-хромосомі клінічна картина близька синдрому Шерешевського - Тернера.

Транслокації - це структурні перебудови, при яких відбувається обмін генетичного матеріалу між хромосомами. Можливі різні види транслокаций: реципрокні, при яких відбувається взаємний обмін фрагментами; нереціпрокние, коли генетичний матеріал однієї хромосоми переноситься на іншу, і нарешті центричні з'єднання. Найбільш часто зустрічаються саме останні транслокации між акроцентріческіе хромосомами. При цьому втрачається тільки невеликий фрагмент коротких плечей акроцентріческіх хромосом. Більшу частину таких перебудов можна вважати збалансованою, так як вони не викликають серйозних відхилень у фенотипі носія транслокации. Однак потомство таких носіїв має клінічно виражені дефекти, характерні для аномального набору хромосом.

Відомо, що хвороба Дауна може спостерігатися як при трисомії по 21-й аутосоме, так і при транслокації фрагмента цієї хромосоми на інші. У таких хворих хромосом 46, але одна з хромосом фактично подвійна, так як до неї ще прикріплений фрагмент 21-ї хромосоми і в результаті така перебудова виявляється не збалансованою. У батьків цих хворих каріотип включав 45 хромосом, але одна з хромосом була фактично подвійний (з транслокацією). При заплідненні яйцеклітини, що містить цю хромосому, нормальним спермием в зиготі фактично будуть три 21-х хромосоми, що фенотипически проявляється хворобою Дауна.

21-я хромосома найчастіше транслокується на 15-у або на інші хромосоми групи Д (13-ма, 14-ю) у жінок, або на 22-ту у чоловіків. У такому випадку у молодих здорових батьків може народитися дитина з хворобою Дауна на відміну від трисомії 21-ї хромосоми, яка частіше буває у дітей, народжених літніми матерями. Визначити наявність транслокації у індивідуума до народження дитини з хворобою Дауна без дослідження каріотипу фактично неможливо, так як фенотип цих носіїв мало чим відрізняється від фенотипів осіб з нормальними генотипами. Тому у всіх цих випадках дослідження каріотипу має особливо важливе значення.

Механізм розвитку хвороби Дауна при транслокації в одного з батьків можна представити таким чином. При транслокації каріотип індивідуума складається з 45 хромосом, так як одна хромосома збільшена в розмірі. Транслокація стосується всіх клітин, в тому числі і оогоній і сперматогоний. При утворенні статевих клітин (гамет) в одну гамет потрапляє 23 хромосоми, а в іншу 22. Але транслоцироваться хромосома може виявитися як в гамете з 22 хромосомами, так і в гамете з 23 хромосомами. Таким чином, теоретично можливі 4 варіанти гамет: 23 нормальні хромосоми, 23 з транслокацією, 22 нормальні хромосоми та 22 з транслокацією. Якщо транслокацию позначити апострофом, то вийде наступний ряд гамет: 23 23 122 221.

Якщо ці гамети будуть запліднені нормальної гаметой протилежної статі, то отримаємо наступні комбінації: 1) 23 + 23 = = 46 хромосом (нормальний каріотип); 2) 231+ 23 = 461хромосом, але фактично 47 хромосом (в даному випадку розвинеться хвороба Дауна); 3) 22 + 23 = 45 хромосом (така зигота не життєздатна і гине); 4) 221 + 23 = 451хромосом (в цьому випадку народжується індивідуум з транслокацією, як і один з його батьків).

Шанси народити дитину з хворобою Дауна (при транслокації в одного з батьків) складають 33%. Це дуже великий ризик і в такому випадку подальше дітонародження не бажано, тим більше що є ризик отримати транслокацию і в онуків. Якщо народжується дитина з хворобою Дауна, викликаної трисомией по 21-й хромосомі, у батьків з нормальним каріотипом, то шанси народити повторно такого ж дитину дуже незначні. Однак не у всіх випадках при народженні дитини з хворобою Дауна внаслідок транслокації 21-ї хромосоми транслокация мається на соматичних клітинах матері. Приблизно у половини матерів каріотип буває нормальний, а транслокация сталася під час мейозу, що передує утворенню яйцеклітини, з якої розвинувся організм хворого ребенка.Глава 5. Мозаїцизм.

Це стан, коли в організмі перемішані клітини з нормальним і аномальним каріотипами, скажімо, 46/47 або 46/45. Виникає воно внаслідок нерозходження хромосом на початкових етапах ембріонального розвитку. Мозаїцизм дає стерті, слабо виражені симптоми захворювання в порівнянні з хворими, у яких змінений каріотип у всіх клітинах. Хворий з мозаїчним варіантом хвороби Дауна може мати тільки деякі фізичні ознаки цього захворювання. Розвиток інтелекту не порушено. При мозіацізме 45ХО / 46ХХ синдром Шерешевського - Тернера виражений більш м'яко. У таких хворих можливий розвиток тканин яєчників і овуляція. При каріотипі 46ХУ / 47ХХУ більш м'яко виражений синдром Клайнфельтера. Серед хворих жінки- і чоловіки-мозаїки із зазначеними каріотипами зустрічаються частіше, ніж «чисті» випадки синдрому Шерешевського - Тернера або синдрому Клайнфельтера. З віком клон аномальних клітин поступово елімінується, і тому важко встановити мозаїцизм в літньому віці, хоча в ембріональному і ранньому постембріональному періоді він був виражений досить і міг привести до розвитку фенотипічних ознак захворювання. Чим менше в організмі аномальних клітин, тим слабкіше виражені ознаки захворювання. Цим можна пояснити стерті та рудиментарні форми даних захворювань. [7]

При захворюваннях крові може відбуватися кратне (полиплоидия) або некратні (анеуплоідія) збільшення кількості хромосом. Однак воно спостерігається тільки в клітинах крові, а в інших же соматичних клітинах каріотип нормальний.

Список використаної літератури.

1. Бердишев Г.Д., Криворучко І.Ф. Генетика людини з основами медичної генетики. - Київ: Вища школа, 1979.

2. Бочков Н.П. Генетика людини. - Москва, 1973.

3. Фогель Ф. Мотульський А. Генетика людини: історія хромосоми людини, формальна генетика. Москва: Мир, 1989.

4. Штерн, Курт Основи генетики людини. Москва: Медицина, 1965

5. Маккьюсик В. Гнатюк людини. Москва: Мир, 1967.

[1] Генетика людини з основами медичної генетики. Бердишев Г.Д., Криворучко І.Ф. с.5-21

[2] Генетика людини: історія хромосоми людини, формальна генетика. Фогель Ф. Мотульський А. с.11-19

[3] Генетика людини: історія хромосоми людини, формальна генетика. Фогель Ф. Мотульський А. С.23-31

[4] Генетика людини. Бочков Н.П. с. 44

[5] Генетика людини. Маккьюсик. В. с.10, 13-22

[6] Основи генетики людини. Штерн, Курт. с.41-60

[7] Генетика людини. Бочков Н.П. с.90

Авіація і космонавтика
Автоматизація та управління
Архітектура
Астрологія
Астрономія
Банківська справа
Безпека життєдіяльності
Біографії
Біологія
Біологія і хімія
Біржова справа
Ботаніка та сільське господарство
Валютні відносини
Ветеринарія
Військова кафедра
Географія
Геодезія
Геологія
Діловодство
Гроші та кредит
Природознавство
Журналістика
Зарубіжна література
Зоологія
Видавнича справа та поліграфія
Інвестиції
Інформатика
Історія
Історія техніки
Комунікації і зв'язок
Косметологія
Короткий зміст творів
Криміналістика
Кримінологія
Криптологія
Кулінарія
Культура і мистецтво
Культурологія
Логіка
Логістика
Маркетинг
Математика
Медицина, здоров'я
Медичні науки
Менеджмент
Металургія
Музика
Наука і техніка
Нарисна геометрія
Фільми онлайн
Педагогіка
Підприємництво
Промисловість, виробництво
Психологія
Психологія, педагогіка
Радіоелектроніка
Реклама
Релігія і міфологія
Риторика
Різне
Сексологія
Соціологія
Статистика
Страхування
Будівельні науки
Будівництво
Схемотехніка
Теорія організації
Теплотехніка
Технологія
Товарознавство
Транспорт
Туризм
Управління
Керуючі науки
Фізика
Фізкультура і спорт
Філософія
Фінансові науки
Фінанси
Фотографія
Хімія
Цифрові пристрої
Екологія
Економіка
Економіко-математичне моделювання
Економічна географія
Економічна теорія
Етика

8ref.com

© 8ref.com - українські реферати


енциклопедія  бефстроганов  рагу  оселедець  солянка