трусики женские украина

На головну

 Рідинно-рідинна хроматографія - Хімія

Федеральне агентство з освіти

ГОУ ВПО "Челябінський державний університет"

Хімічний факультет

Кафедра фізичної та аналітичної хімії

Курсова робота з аналітичної хімії

Тема: "Рідинно-рідинна хроматографія"

Челябінськ

2010

Зміст

Введення

1. Специфіка методу рідинно-рідинна хроматографія

2. Апаратура для рідинної хроматографії

3. колоночного варіант

4. Розподільна хроматографія на папері (паперова хроматографія)

5. Гель-хроматографія

6. Високоефективна рідинна хроматографія

7. Застосування

Список літератури

хроматографія сорбційний хімічний розподільний

Введення

Хроматографія - це фізико-хімічний метод розділення і аналізу сумішей газів, парів, рідин або розчинених речовин сорбційними методами в динамічних умовах.

Метод заснований на різному розподілі речовин між двома несмешивающимися фазами - рухливого і не рухомий. Рухомою фазою може бути рідина або газ, нерухомою фазою - тверда речовина, яке називають носієм. При русі рухомої фази вздовж нерухомої, компоненти суміші сорбируются на нерухомій фазі. Кожен компонент сорбируется у відповідності зі спорідненістю до матеріалу нерухомої фази (внаслідок адсорбції або інших механізмів). Тому нерухому фазу називають також сорбентом. Захоплені сорбентом молекули можуть перейти в рухому фазу і просуватися з нею далі, потім знову сорбироваться. Таким чином, хроматографію можна визначити як процес, заснований на багаторазовому повторенні актів сорбції та десорбції речовини при переміщенні його в потоці рухомої фази уздовж нерухомого сорбенту. Чим сильніше спорідненість компонента до нерухомій фазі, тим сильніше він сорбируется і довше затримується на сорбенті; тим повільніше його просування разом з рухомою фазою. Оскільки компоненти суміші володіють різним спорідненістю до сорбенту, при переміщенні суміші вздовж сорбенту відбудеться поділ: одні компоненти затриматися на початку шляху, інші просунутися далі. У хроматографическом процесі поєднуються термодинамічний (встановлення рівноваги між фазами) і кінетичний (рух компонентів з різною швидкістю) аспекти. Залежно від агрегатного стану фаз, механізму взаємодії та оформлення розрізняють основні види хроматографії, які наведені в таблиці:

 Нерухома фаза Рухома фаза

 газоподібна рідка

 Тверда Газова адсорбційна хроматографія Рідинна адсорбційна, іонообмінна, тонкошарова, осадова хроматографія

 Рідка Газорідинна розподільна хроматографія, капілярна Рідинна розподільна, високоефективна рідинна, гельхроматографія

Розглянемо більш докладно хроматографію в системі рідина-рідина.

1. Специфіка методу рідинно-рідинної хроматографії

Рідинно-рідинна хроматографія (ЖЖХ) по суті, близька до газорідинної хроматографії. На твердий носій також наноситься плівка рідкої фази і через колонку, наповнену таким сорбентом, пропускають рідкий розчин. Рідина, нанесену на носій, називають нерухомою рідкою фазою, а розчинник, що пересувається через носій, - рухомої рідкої фазою. ЖЖХ може проводитися в колонці (стовпчик варіант) і на папері (паперова хроматографія, або хроматографія на папері). [2]

2. Апаратура для рідинної хроматографії

У сучасній рідинної хроматографії використовують прилади різного ступеня складності - від найпростіших систем, до хроматографов високого класу, забезпечених різними додатковими пристроями.

На рис.1. представлена ??блок-схема рідинного хроматографа, що містить мінімально необхідний набір складових частин, у тому чи іншому вигляді, присутніх в будь хроматографічної системі.

Рис. 1 Блок-схема рідинного хроматографа: 2 - насос призначений для створення постійного потоку розчинника. Його конструкція визначається, насамперед, робочим тиском в системі. Для роботи в діапазоні 10-500 МПа використовуються насоси плунжерного (шприцевого), або пістони типів. Недоліком перших є необхідність періодичних зупинок для заповнення елюентом, а друге - велика складність конструкції і, як наслідок, висока ціна. Для простих систем з невисокими робочими тисками 1-5 МПа з успіхом застосовують недорогі перистальтические насоси, але так як при цьому важко домогтися сталості тиску і швидкості потоку, їх використання обмежене препаративних завданнями.

3 - інжектор забезпечує введення проби суміші поділюваних компонентів у колонку з досить високою відтворюваністю. Прості системи введення проби - "stop-flow" вимагають зупинки насоса і, тому, менш зручні, ніж петльові дозатори, розроблені фірмою Reodyne.

4 - колонки для ВЕРХ являють собою товстостінні трубки з нержавіючої сталі, здатні витримати високий тиск. Велику роль відіграє щільність і рівномірність набивання колонки сорбентом. Для рідинної хроматографії низького тиску з успіхом використовують товстостінні скляні колонки.

5 - термостат забезпечує постоянноство температури.

6 - детектори для рідинної хроматографії мають проточну кювету, в якій відбувається безперервне вимірювання якої-небудь властивості протікає елюента

7 - реєструюча система в найпростішому випадку складається з диференціального підсилювача і самописця. Бажано також наявність інтегратора, що дозволяє розраховувати відносні площі одержуваних піків. У складних хроматографических системах використовується блок інтерфейсу, що з'єднує хроматограф з персональним комп'ютером (8), який здійснює не тільки збір та обробку інформації, але і управляє приладом. [11]

3. колоночного варіант

Поділ суміші речовин у рідинно-рідинної хроматографії грунтуються на відмінності коефіцієнтів розподілу речовини між несмешивающимися розчинниками. Коефіцієнт розподілу речовини дорівнює:

Кп, н = сп / сн

де спи СН- концентрація речовини в рухомою і нерухомою фазах.

Для членів одного гомологічного ряду встановлені деякі закономірності в величинах Кп.н. Відома, наприклад, залежність Кп.нв даному гомологическом ряду від числа атомів вуглецю.

Пошук несмешивающихся фаз, що забезпечують поділ, зазвичай проводиться емпірично на основі експериментальних даних. Широке застосування в рідинно-рідинної хроматографії отримали потрійні системи, що складаються з двох змішуються розчинників і третього, розчинного в обох фазах. Такі системи дозволяють отримувати набір несмешивающихся фаз різної селективності. Як приклад можна привести систему з несмешивающихся між собою гептана і води, в яку введено етанол, що розчиняється в обох розчинниках.

Хоча в якості рухомої і нерухомої фаз вибираються розчинники, смешивающиеся між собою, все ж у багатьох системах спостерігається деяка взаємна розчинність. Щоб запобігти процеси взаємного розчинення рідин в ході хроматографирования, рухливу рідку фазу попередньо насичують нерухомою. Для збереження постійного складу фаз застосовують також метод хімічного закріплення нерухомої фази на сорбенті. При цьому використовують взаємодію розчинника з групами ОН-на поверхні носія. Адсорбенти із закріпленою на їх поверхні рідкої фазою випускаються промисловістю.

Ефективність колонки пов'язана з в'язкістю, коефіцієнтом дифузії та іншими фізичними властивостями рідин. Зі зменшенням в'язкості рухомої фази скорочується тривалість аналізу, але зі збільшенням в'язкості дещо зростає ефективність. У практиці зазвичай використовують маловязкие розчинники, оскільки зростання ефективності колонок при збільшенні в'язкості не надто велике.

Носій нерухомої фази повинен мати досить розвиненою поверхнею, бути хімічно інертним, міцно утримувати на своїй поверхні рідку фазу і не розчинятися в застосовуваних розчинниках. В якості носіїв використовують речовини різної хімічної природи: гідрофільні носії - силікагель, целюлоза та ін. І гідрофобні - фторопласт, тефлон і інші полімери. [2]

Рис 3. Форма хроматограми залежно від ефективності і селективності хроматографічної системи:

а - нормальна селективність, знижена ефективність;

б - нормальна ефективність і селективність;

в - підвищена селективність, нормальна ефективність. [12]

4. Розподільна хроматографія на папері (паперова хроматографія)

Крім звичайних носіїв, які використовуються для заповнення колонок, в розподільній хроматографії застосовують специфічний носій, що дозволяє обходитися взагалі без колонки. Таким носієм є спеціальна хроматографічна папір, а методика, заснована на її застосуванні, отримала назву розподільної хроматографії на папері або розподільної паперової хроматографії. Багато в чому вона схожа з хроматографією в тонкому шарі (ТШХ). Паперову хроматографію, як і хроматографію взагалі, можна розділити на:

· Розподільну

· Адсорбційні

· Іонообмінних

· Препаративна

· Аналітичну.

У розподільній паперової хроматографії можна виділити:

· Нормальну

· Звернених-фазну хроматографію. [2]

За технікою виконання розрізняють такі види паперової хроматографії:

· Одновимірного

· Двовимірні (хроматографирования виробляють двічі у взаємно протилежних напрямках: після обробки проби одним розчинником хроматограму повертають на 90 ° і хроматографіруют вдруге вже іншим розчинником)

· Кругову

· Електрофоретичний [2]

Рис 4. I - лінія старту;

II - лінія фронту;

1 - довжина плями;

2 - відрізок від лінії старту до плями;

3 - відрізок від лінії старту до центру плями -;

4 - відрізок від лінії старту до лінії фронту -.

Важливою характеристикою в паперовій розподільної хроматографії, так само як і в ТШХ, є Rf = x / Xf, де х - зміщення зони компонента; хf- зміщення фронту розчинника. Методика визначення Rf у паперовій хроматографії не відрізняється від відповідної методики в ТШХ, заснованої на вимірах відповідно до рис. 1. У початковий момент часу хроматографіруемого проба наноситься на початкову (стартову) лінію паперової смужки і піддається дії рухомої фази (розчинника). Якщо компоненти пофарбовані, через деякий час на хроматограмі можна буде бачити окремі кольорові плями. Перший компонент матиме Rf1 = x1 / xf, другий -Rf2 = X2 / Xfі т. Д. [2]

За ідеальних умов коефіцієнт Rf визначається тільки природою речовини, параметрами паперу і властивостями розчинників, але не залежить від концентрації речовини і присутності інших компонентів. Насправді коефіцієнт Rf в деякій мірі виявився залежним від цих факторів і техніки експерименту. [2]

Хроматографічна папір має бути хімічно чистою, нейтральною, інертною по відношенню до компонентів розчину та рухомого розчинника і бути однорідною по щільності. Мають значення також такі властивості, як структура молекул целюлози в папері, набухаемость, орієнтація волокна та інші, що впливають на швидкість руху розчинника і на інші характеристики процесу. [2]

В атмосфері водяної пари папір поглинає значну кількість вологи (до 20 ... 25% своєї маси), тому, коли нерухомій рідкої фазою є вода, ніякого додаткового зволоження паперу не роблять. При виборі в якості нерухомої фази деяких органічних речовин, гідрофільну папір перетворюють на гидрофобную, просочуючи її розчинами різних гідрофобних речовин (парафіну, рослинного масла та ін.). [2]

У вибраних розчинниках компоненти проби повинні мати різну розчинність, інакше поділу взагалі не відбудеться. В розчиннику, що є рухомою фазою, розчинність кожного компонента повинна бути меншою, ніж в розчиннику нерухомої фази, але все ж складати цілком помітне значення. Це обмеження пов'язане з тим, що якщо розчинність речовини буде дуже велика, речовина буде рухатися разом з фронтом розчинника, а якщо розчинність буде дуже мала, речовина залишиться на початковій лінії. [2]

Для поділу водорозчинних речовин в якості рухомої фази зазвичай беруть органічний розчинник, а в якості нерухомої - воду. Якщо речовина розчинно в органічних розчинниках, вода використовується вже в якості рухомої фази, а органічний розчинник є нерухомою фазою. Це так званий метод звернених фаз. [2]

До розчинників зазвичай ставляться такі вимоги:

· Розчинники рухомої і нерухомої фаз не повинні змішуватися

· Склад розчинника в процесі хроматографування не повинен змінюватися

· Розчинники повинні легко віддалятися з паперу

· Бути недефіцитних і нешкідливими для людини. [2]

Індивідуальні розчинники в розподільній хроматографії використовують відносно рідко. Найчастіше для цієї мети використовують суміші речовин, наприклад бутилового або амилового спирту з метиловим або етиловим, насичені водні розчини фенолу, крезолу та ін., Суміші бутилового спирту з оцтовою кислотою, аміаком і т. Д. Застосування різних сумішей розчинників дозволяє плавно змінювати Rfі тим самим створювати найбільш сприятливі умови поділу. [2]

У паперовій хроматографії речовини розрізняються за їх відносному положенню на папері після того, як розчинник пройде певну відстань. Невелика кількість розчину суміші (10-20мкл), яку потрібно розділити, наносять у зазначену точку на папері і висушують. Отримане пляма називають стартовим. Потім папір поміщають в герметичну камеру і один її кінець занурюють в розчинник, який є рухомою фазою. Під дією капілярних сил розчинник рухається по паперу, розчиняючи і тягнучи за собою компоненти зразка. До початку руху зразок повинен повністю розчинитися, тому швидкість розчинення компонентів у рухомій фазі є одним з факторів, що визначають ефективність розділення. Після того, як розчинник пройде певну відстань, лист виймають і сушать. Плями на хроматограмах можуть бути виявлені за кольором, флуоресценції, за допомогою хімічних реакцій, для чого папір обприскують або занурюють у різні реагенти, або ж по радіоактивності. Ідентифікацію проводять зазвичай шляхом порівняння із зразками з відомими величинами Rf або після елюювання, яке зводиться до вирізання зони, що містить пляма, і подальшого промиванню її відповідним розчинником. [5]

5. Гель-хроматографія

Гель-фільтрація (синонім гель-хроматографія) - метод розділення суміші речовин з різними молекулярними масами шляхом фільтрації через різні так звані ніздрюваті гелі. [7]

Нерухомою фазою в гель-хроматографії є ??розчинник, що знаходиться в порах гелю, а рухомий - сам розчинник, т.е і рухому і нерухому фази становить одне і теж речовина або одна і та ж суміш речовини. Гель готують на основі, наприклад, декстрану, поліакриламіду або інших природних і синтетичних сполук.

На відміну від інших хроматографічних методів, що використовують відмінності в хімічних властивостях поділюваних речовин, що виявляються при їх розподілі між стаціонарною і рухомою фазами, поділ грунтується на ситова ефекті, характерному для гелів з певним радіусом пор. Розчинник (рухома фаза) заповнює як зовнішній обсяг між зернами гелю, так і внутрішній обсяг пір. Об'єм розчинника між зернами гелю - Vмназивают проміжним, транспортним або мертвим об'ємом, а внутрішній об'єм пор - Vпрассматрівается як об'єкт стаціонарної фази. Коли в колонку вводять пробу, яка містить кілька типів іонів або молекул з різними розмірами, то вони прагнуть з рухомої фази проникнути всередину пір. Таке проникнення обумовлено ентропійним розподілом, оскільки концентрація молекул поділюваних речовин в зовнішньому розчині виявляється вищою, ніж в поровом просторі. Але воно стає можливим тільки в тому випадку, якщо розміри іонів або молекул менше діаметра пір. [3]

Рис 5 Загальний вигляд градуировочной кривої в гель-хроматографії:

1 - область винятку, де всі молекули мають розмір більше m2;

2 - область проникнення або поділу, де розміри молекул лежать в інтервалі від m1і m2;

3 - область, де відбувається повне проникнення молекул з розмірами менш m1. [3]

У процесі гель-хроматографирования можуть бути відокремлені великі молекули, які гелем НЕ сорбуються, так як їх розміри перевищують розміри пір, від дрібних, які проникають в пори, а потім можуть бути елюіровать. Проводяться і більш тонкі поділу, так як розміри пір можна регулювати, змінюючи, наприклад, склад розчинника і, як наслідок, набухаемость гелю. Гель-хроматографія може бути виконана в стовпчики варіанті і в тонкошаровому.

Застосовувані на практиці гелі зазвичай поділяють на м'які, напівтверді і жорсткі. М'якими гелями є високомолекулярні органічні сполуки з незначним числом поперечних зв'язків. Фактор ємності, рівний відношенню обсягу розчинника всередині гелю до його об'єму поза гелю, у них дорівнює 3. При набуханні вони значно збільшують власний об'єм. Це сефадексе або декстранових гелі, агарочние гелі, крохмаль та ін. Вони застосовуються для розділення сумішей низькомолекулярних речовин, часто в тонкошаровому варіанті. Хроматографирования на м'яких гелях називають гель - фільтрацією.

Напівтверді гелі отримують шляхом полімеризації. Великого поширення набули стірогелі - продукти сополимеризации стиролу і дивинилбензола з великим числом поперечних зв'язків. Фактор ємності напівжорстких гелів лежить в межах 0,8 ... 1,2, їх обсяг при набуханні збільшується не надто значно (в 1,2 ... 1,8 рази). Хроматографирования на напівжорстких гелях називають гель-проникаючої хроматографії.

До жорстких гелям відносять силикагели і часто пористі скла, хоча вони і не є гелями. Жорсткі гелі мають невеликий фактор ємності (0,8 ... 1,1) і фіксований розмір пір. Ці матеріали використовують в гель-хроматографії при високому тиску.

Розчинники гель-хроматографії повинні розчиняти всі компоненти суміші, змочувати поверхню гелю і не адсорбироваться на ній.

Практичне застосування гель-хроматографії пов'язано, головним чином, з поділом суміші високомолекулярних сполук, хоча нерідко вони використовуються для розділення і низькомолекулярних, так як поділ цим методом можливо при кімнатній температурі. [2]

6. Високоефективна рідинна хроматографія (ВЖКХ)

Високоефективна рідинна хроматографія - найбільш ефективний метод аналізу органічних проб складного складу. Процес аналізу проби ділиться на 2 етапи:

· Поділ проби на складові компоненти;

· Детектування і вимірювання вмісту кожного компонента.

Завдання поділу вирішується за допомогою хроматографічної колонки, яка являє собою трубку, заповнену сорбентом. При проведенні аналізу через хроматографічну колонку подають рідину (елюент) певного складу з постійною швидкістю. В цей потік вводять точно отмеренную дозу проби.

Компоненти проби, введеної в хроматографическую колонку, через їх різного спорідненості до сорбенту колонки рухаються по ній з різними швидкостями і досягають детектора послідовно в різні моменти часу.

Таким чином, хроматографічна колонка відповідає за селективність і ефективність розділення компонентів. Підбираючи різні типи колонок можна управляти ступенем поділу аналізованих речовин. Ідентифікація сполук здійснюється за їх часом утримування. Кількісне визначення кожного з компонентів розраховують, виходячи з величини аналітичного сигналу, виміряного за допомогою детектора, підключеного до виходу хроматографічної колонки.

При аналізі з'єднань з низькими ГДК (біогенні аміни, поліароматичних вуглеводні, гормони, токсини) через трудомісткість підготовки реальних проб особливо важливою характеристикою стає чутливість і селективність методу. Застосування флуоріметріческого детектора дозволяє не тільки знизити межі виявлення, а й селективно виділити аналізовані речовини на тлі матричних і супутніх компонентів проби.

Метод ВЕРХ застосовується в санітарно-гігієнічних дослідженнях, екології, медицині, фармацевтиці, нафтохімії, криміналістиці, для контролю якості і сертифікації продукції.

В якості блоку подачі елюента використовується насос "Пітон" шприцевого типу, який має такі особливості:

· Відсутність пульсацій тиску при подачі розчинника;

· Великий діапазон об'ємних швидкостей потоку;

· Великий обсяг камери насоса;

· Розширюваність (можливість поєднувати кілька блоків для створення градієнтної системи).

У хроматографічної системі можуть використовуватися різні типи детекторів, наприклад, "Флюорат-02-2М" (спектральна селекція здійснюється фільтрами) або "Флюорат-02 Панорама" (спектральна селекція здійснюється монохроматорамі). [8]

7. Застосування

Рідинна хроматографія найважливіший фізико-хімічний метод дослідження в хімії, біології, біохімії, медицині, біотехнології. Її використовують для аналізу, розділення, очищення і виділення амінокислот, пептидів, білків, ферментів, вірусів, нуклеотидів, нуклеїнових кислот, вуглеводів, ліпідів, гормонів і т. Д .; вивчення процесів метаболізму в живих організмах лікарських препаратів; діагностики в медицині; аналізу продуктів хімічного і нафтохімічного синтезу, напівпродуктів, барвників, палив, мастил, нафт, стічних вод; вивчення ізотерм сорбції з розчину, кінетики та селективності хім. процесів.

У хімії високомолекулярних сполук і у виробництві полімерів за допомогою рідинної хроматографії аналізують якість мономерів, вивчають молекулярно-масовий розподіл і розподіл за типами функціональності олігомерів і полімерів, що необхідно для контролю продукції. Рідинну хроматографію використовують також у парфумерії, харчовій промисловості, для аналізу забруднень навколишнього середовища, в криміналістиці. [9]

Висновок

Початок ХХ століття ознаменувався відкриттям хроматографічного методу аналізу, що збагатив і об'єднав різні галузі науки, без яких немислимий науковий прогрес XXI століття. Впровадження хроматографических методів, і в першу чергу рідинної хроматографії, в медицину дозволило вирішити багато життєво важливі проблеми: дослідження ступеня чистоти і стабільності лікарських засобів, препаративні виділення індивідуальних гормональних препаратів (наприклад, інсуліну, інтерферону), кількісне визначення в біологічних об'єктах нейромедіаторів: адреналіну, норадреналіну. З наявністю цих речовин у живому організмі пов'язують здатність до запам'ятовування, навчання, придбання будь-яких навичок. Ідентифікація методами ВЕРХ стероїдів, амінокислот, амінів та інших сполук виявилася вкрай важливою при діагностиці деяких спадкових захворювань: інфаркту міокарда, діабету, різних захворювань нервової системи. Однією з актуальних задач клінічної медицини для експрес-діагностики є проведення так званого профільного аналізу компонентів біологічного об'єкта, здійснюваного методами рідинної хроматографії, що дозволяє не проводити ідентифікацію кожного піку, а зіставляти профілі хроматограмм для укладення про норму або патології. Обробка величезного масиву інформації здійснюється тільки з використанням ЕОМ (метод отримав назву "метод розпізнавання образів"). [10]

Список літератури

1. Васильєв В. П. Аналітична хімія, У 2 кн. Кн. 2 Фізико-хімічні методи аналізу: Учеб. для студ. вузів, що навчаються за хіміко-технол. спец. - 4-е вид., Стереотип. - М .: Дрофа, 2004 - 384 с.

2. Москвін Л.М., Царицина Л.Г. Методи розділення і концентрування в аналітичній хімії. - Л .: Хімія, 1991. - 256 с.

3. http://bibliofond.ru/view.aspx?id=43468

4. http://ru.wikipedia.org/wiki/Бумажная_хроматография

5. http://referats.qip.ru/referats/preview/93743/6

6. http://www.curemed.ru/medarticle/articles/12186.htm

7. http://www.lumex.ru/method.php?id=16

8. http://www.xumuk.ru/encyklopedia/1544.html

9. http://www.pereplet.ru/obrazovanie/stsoros/1110.html

10. http://www.chem.msu.su/rus/teaching/oil/spezprakt-chr.html

11. http://www.prochrom.ru/ru/?idp=110

Авіація і космонавтика
Автоматизація та управління
Архітектура
Астрологія
Астрономія
Банківська справа
Безпека життєдіяльності
Біографії
Біологія
Біологія і хімія
Біржова справа
Ботаніка та сільське господарство
Валютні відносини
Ветеринарія
Військова кафедра
Географія
Геодезія
Геологія
Діловодство
Гроші та кредит
Природознавство
Журналістика
Зарубіжна література
Зоологія
Видавнича справа та поліграфія
Інвестиції
Інформатика
Історія
Історія техніки
Комунікації і зв'язок
Косметологія
Короткий зміст творів
Криміналістика
Кримінологія
Криптологія
Кулінарія
Культура і мистецтво
Культурологія
Логіка
Логістика
Маркетинг
Математика
Медицина, здоров'я
Медичні науки
Менеджмент
Металургія
Музика
Наука і техніка
Нарисна геометрія
Фільми онлайн
Педагогіка
Підприємництво
Промисловість, виробництво
Психологія
Психологія, педагогіка
Радіоелектроніка
Реклама
Релігія і міфологія
Риторика
Різне
Сексологія
Соціологія
Статистика
Страхування
Будівельні науки
Будівництво
Схемотехніка
Теорія організації
Теплотехніка
Технологія
Товарознавство
Транспорт
Туризм
Управління
Керуючі науки
Фізика
Фізкультура і спорт
Філософія
Фінансові науки
Фінанси
Фотографія
Хімія
Цифрові пристрої
Екологія
Економіка
Економіко-математичне моделювання
Економічна географія
Економічна теорія
Етика

8ref.com

© 8ref.com - українські реферати


енциклопедія  бефстроганов  рагу  оселедець  солянка