трусики женские украина

На головну

 Протеоміка - Біологія і хімія

А.А. Замятнін, доктор біологічних наук, Інститут біохімії ім. А.Н.Баха РАН

Наша розповідь буде присвячений одній з наймолодших фундаментальних наук (якщо не наймолодшою), яка народилася всього лише кілька років тому разом з тими, хто ще зараз навчається в початковій школі. На відміну від багатьох інших наук про протеоміці можна точно сказати, за яких обставин вона виникла, вказати рік, коли з'явилося її назву і хто його придумав.

Почнемо з обставин. У другій половині XX в. бурхливо розвивалися аналітичні методи біохімії, молекулярної біології та обчислювальної техніки. Видатні успіхи, досягнуті в цих областях, привели до можливості розшифровки величезних послідовностей основ нуклеїнових кислот і до запису повного генома живого організму. Вперше повний геном був розшифрований в 1980 р [1] у бактеріофага phi Х-174 (близько 5 · 103 підстав), потім у першої бактерії - Haemophilus influenzae (1, 8 · 106 підстав) [2]. А c завершенням XX в. була закінчена грандіозна робота з розшифрування повного генома людини - виявлення послідовності приблизно 3 млрд підстав нуклеїнових кислот [3]. На цю роботу було витрачено кілька мільярдів доларів (приблизно по одному долару на одну підставу). Всього ж вже розшифровані геноми декількох десятків видів живих організмів. Саме в цей період виникли дві нові біологічні науки: в 1987 р вперше в науковій пресі було використано слово «геноміка» [4], а в 1993 р - «біоінформатика» [5].

У кожного біологічного виду частину генома представлена ??ділянками, кодирующими амінокислотні послідовності білків. Наприклад, таких ділянок у людини налічується близько 100 000 (за деякими оцінками, це число може досягати 300 000, а з урахуванням хімічно модифікованих структур - кількох мільйонів). Здавалося б, знаючи повний геном і генетичний код, можна шляхом трансляції отримати всі відомості про структуру білків. Проте все не так просто. Поступово ставало очевидним, що в даній розглянутій клітинній системі організму немає кореляції між наборами мРНК і білків. Крім того, багато білки, синтезовані на рибосомах відповідно до нуклеотидної послідовністю, після синтезу піддаються хімічним модифікаціям і можуть існувати в організмі в модифікованої і немодифікованої формах. І ще важливо те, що білки мають різноманітними просторовими структурами, які на сьогоднішній день не можна визначити за лінійним послідовностям нуклеотидів і навіть амінокислот. Тому пряме виділення і визначення структур усіх функціонуючих білків залишається як і раніше актуальним завданням (пряме визначення структури на сьогоднішній день здійснено приблизно лише для 10% білків людини). Так, на додаток до геноміки з'явився термін «протеоміка», об'єктом дослідження якої є протеом (від англ. PROTEins - білки і genOMe - геном). А в науковій пресі згадка про протеома вперше з'явилося в 1995 р [6].

Слід додати, що велику роль у життєдіяльності організмів відіграють численні короткі фрагменти білкових попередників, які називаються олигопептидами, або просто пептидами. Саме через них спостерігається такий різнобій в оцінці кількості білково-пептидних компонентів у представників одного біологічного виду. Тому поряд з термінами «протеом» і «протеоміка» в даний час вже вживаються такі терміни, як «пептидом» і «пептідоміка», що представляють собою частину протеома та протеоміки. Про різноманіття структури і функцій білків і пептидів на сторінках газети «Біологія» нами було розказано раніше [7].

Отже, сформулюємо визначення нових наук, які з'явилися за життя нинішнього молодого покоління і які тісно взаємопов'язані один з одним (рис. 1).

Рис. 1. Схема, що ілюструє повну взаємозв'язок трьох нових біологічних наук

Геноміка - наука, що займається вивченням структури і функцій генів (геном - сукупність всіх генів організму).

Біоінформатика - наука, що займається вивченням біологічної інформації за допомогою математичних, статистичних та комп'ютерних методів.

Протеоміка - наука, що займається вивченням сукупності білків і їх взаємодій в живих організмах (протеом - сукупність всіх білків організму).

Відзначимо також, що протеоміка в загальних рисах включає в себе структурну протеоміки, функціональну протеоміки та прикладну протеоміки, які ми розглянемо окремо.

Структурна протеоміка

Найбільш яскравою особливістю біології є різноманітність. Воно проглядається на всіх рівнях біологічної організації (біологічні види, морфологія, хімічна структура молекул, мережа регуляторних процесів і т.д.). Повною мірою це відноситься і до білків. Масштаб їх структурного розмаїття досі до кінця не виявлено. Досить сказати, що число амінокислотних залишків в одному білку може становити від двох (мінімальна структура, що має пептидную зв'язок) до десятків тисяч, а білок тітін людини містить 34 350 амінокислотних залишків і на сьогоднішній день є рекордсменом - найбільшої з усіх відомих білкових молекул.

Щоб отримати відомості про протеома, необхідно спочатку його виділити і очистити від інших молекул. Оскільки число білків у всьому протеома (тобто у всьому організмі) вельми велике, зазвичай беруть тільки частину організму (його орган або тканину) і різними методами виділяють білкову компоненту. За майже 200-річну історію вивчення білків розроблено безліч методів виділення білків - від простого сольового осадження до сучасних складних методів, що враховують різні фізичні та хімічні властивості цих речовин. Після отримання чистої фракції індивідуального білка визначається його хімічна структура.

У структурній протеоміці проводиться визначення структури не одного, а відразу безлічі білків, і до теперішнього часу для цього розроблено спеціальний цикл процедур і створений арсенал відповідних високоточних приладів. (Повний набір обладнання для протеомних досліджень варто більше одного мільйона доларів.)

Рис. 2. Інструменти протеоміки

На рис. 2 наведена схема лабораторного циклу від приготування зразка до визначення його структури. Після виділення та очищення (на малюнку представлений вже виділений і очищений препарат) за допомогою двовимірного електрофорезу проводиться поділ білків. Це розділення йде за двома напрямками: в одному поділяються молекули білка, що мають різну масу, в іншому - різний сумарний електричний заряд. В результаті цієї найтоншої процедури на спеціальному носії однакові молекули групуються, утворюючи макроскопічні плями, причому в кожному плямі містяться тільки однакові молекули. Число плям, тобто число різних білків або пептидів, може становити багато тисяч (рис. 3, 4), і для їх дослідження використовуються автоматичні пристрої для обробки та аналізу. Потім проводиться відбір плям і введення містяться в них речовин в складний фізичний прилад - мас-спектрометр, за допомогою якого і визначається хімічна (первинна) структура кожного білка.

Рис. 3. Приклад двовимірної електрофореграми білків з екстракту печінки миші [8]

Рис. 4. Приклад двовимірної електрофореграми пептидів з цереброспинальной рідини людини [9]

Рис. 5. Нуклеотидна послідовність гена, що кодує сироватковий альбумін людини

Первинну структуру білка можна також визначити, користуючись результатами геноміки та біоінформатики. На рис. 5 дана повна структура гена сироватковогоальбуміну людини. Вона містить 1830 азотистих основ, які кодують 610 амінокислотних залишків. Цей ген, як і абсолютна більшість інших, починається з кодону atg, що кодує залишок метіоніну, і закінчується одним з стоп-кодонів, в даному випадку taa. Таким чином кодується структура, що складається з 609 амінокислотних залишків (рис. 6). Однак ця структура - молекула ще не сироватковогоальбуміну, а лише його попередника. Перші 24 амінокислотних залишку являють собою так званий сигнальний пептид, який при переході молекули з ядра в цитоплазму отщепляется, і тільки після цього утворюється структура сироваткового альбуміну, одержувана при виділенні цього білка. У підсумку дана молекула містить 385 амінокислотних залишків.

Рис. 6. Амінокислотна послідовність попередника сироватковогоальбуміну людини, транслювати з нуклеотидної послідовності за допомогою генетичного коду

Рис. 7. Просторова (третинна) структура молекули сироваткового альбуміну людини

Однак аминокислотная послідовність не розкриває просторову структуру білка. З точки зору термодинаміки, витягнута лінійна структура енергетично невигідна, і тому вона специфічним для кожної послідовності чином згортається в унікальну просторову структуру, яка може бути визначена за допомогою двох потужних фізичних методів - рентгеноструктурного аналізу та методу ядерного магнітного резонансу (ЯМР-спектроскопії). За допомогою першого з них визначені просторові структури вже декількох тисяч білків, у тому числі і сироватковогоальбуміну людини, зображення якого представлено на рис. 7. Ця структура, на відміну від первинної (амінокислотної послідовності), називається третинної і в ній добре видно спіралізують ділянки, які є елементами вторинної структури.

Таким чином, завдання структурної протеоміки зводиться до виділення, очищення, визначенню первинної, вторинної та третинної структур всіх білків живого організму, а її основними засобами є двовимірний електрофорез, мас-спектрометрія і біоінформатика.

Біоінформатика білків

Існування величезної кількості різноманітних білків призвело до необхідності створення інформаційних масивів - баз (або банків) даних, в які заносилися б всі відомі про них відомості. В даний час існує безліч загальних і спеціалізованих баз даних, які доступні в Інтернеті кожному бажаючому. У загальних базах містяться відомості про всіх відомих білках живих організмів, тобто про глобальне протеома всього живого. Прикладом такої бази є SwissProt-TrEMBL (Швейцарія-Німеччина), в якій на сьогоднішній день містяться структури майже 200 тисяч білків, встановлені аналітичними методами, і ще майже 2 млн структур, які визначені в результаті трансляції з нуклеотиднихпослідовностей [10]. На рис. 8 і 9 показано кількість існуючих білків, які відомі для кожного заданого числа амінокислотних залишків. Осі абсцис на цих графіках обмежені 2000 залишків, але, як вже сказано вище, хоча і не часто, але зустрічаються і істотно більші молекули. З даних, представлених на малюнках, випливає, що найбільше число білків містить по кілька сотень амінокислотних залишків. До них відносяться ферменти та інші досить мобільні молекули. Серед більш великих білків багато таких, які виконують опорну або захисну функції, скріплюючи біологічні структури й надаючи їм міцність.

Рис. 8. Розподіл відомих (виділених) білків за кількістю амінокислотних залишків

Рис. 9. Розподіл транслювати амінокислотних послідовностей по числу мінокіслотних залишків

Рис. 10. Розподіл відомих природних олигопептидов по числу амінокислотних залишків

У глобальному протеома особливе місце займають невеликі дуже рухливі молекули, що містять не більше 50 амінокислотних залишків і володіють специфічним спектром функціональної активності. Вони називаються олигопептидами, або просто пептидами. Для них, тобто для глобального пептідома, створений особливий банк даних, який називається EROP-Moscow. Ця назва є абревіатурою від терміна Endogenous Regulatory OligoPeptides (ендогенні регуляторні олігопептиди), і вказує на те, що банк створений і базується в столиці нашої країни [11]. На сьогоднішній день розшифрована структура майже 6000 олігопептидів, виділених з представників усіх царств живого. Так само як і великі білки, кількість олигопептидов із заданим числом амінокислотних залишків можна зобразити графічно (рис. 10). Судячи з графіком, найчастіше зустрічаються олігопептиди, що містять приблизно 8-10 амінокислотних залишків. Серед них в основному містяться молекули, які беруть участь у регуляції нервової системи, і тому називаються нейропептидами. Очевидно, що найшвидші процеси в живому організмі здійснюються за участю нервової системи, тому пептидні регулятори повинні бути мобільними і отже невеликими. Однак, слід зазначити, що, зважаючи на величезну структурного та функціонального різноманіття як білків, так і пептидів, для них досі не створено суворої класифікації.

Таким чином, в даному випадку завданнями біоінформатики є накопичення інформації про фізико-хімічних і біологічних властивостях білків, аналіз цієї інформації, каталогізація та підготовка інформаційної бази і обчислювальних засобів для виявлення механізмів їх функціонування.

Функціональна протеоміка

Наявність в організмі того чи іншого білка дає підставу припускати, що він володіє (або володів) певною функцією, а весь протеом служить для того, щоб здійснювалася повноцінна життєдіяльність всього організму. Функціональна протеоміка займається визначенням функціональних властивостей протеома, і розв'язувані нею задачі істотно складніше, ніж, наприклад, визначення білково-пептидних структур.

Очевидно, що функціонування протеома здійснюється в багатокомпонентної середовищі, в якому присутня безліч молекул інших хімічних класів - цукрів, ліпідів, простагландинів, різних іонів і багатьох інших, включаючи молекули води. Не виключено, що через деякий час з'являться такі терміни, як «цукром», «ліпідом» і їм подібні. Білкові молекули взаємодіють з оточуючими їх іншими або такими ж, як і вони, структурами, що в кінцевому підсумку призводить до виникнення функціональних реакцій спочатку на молекулярному рівні, а потім і на макроскопічному. Вже відомо безліч таких процесів, у тому числі за участю білків. Серед них взаємодія ферменту з субстратом, антигену з антитілом, пептидів з рецепторами, токсинів з іонними каналами і т.д. (Рецептори та іонні канали також є білковими утвореннями). Для виявлення механізмів цих процесів проводяться як експериментальні дослідження індивідуальних учасників взаємодії, так і системні дослідження засобами біоінформатики. Розглянемо кілька прикладів таких системних підходів.

На рис. 11 показані представники протеома (в даному випадку пептідома) людини - різні гастрину і холецистокініну, які локалізовані в шлунково-кишковому тракті (при написанні амінокислотних послідовностей використаний стандартний однобуквений код, розшифровка якого була дана нами раніше [7]). Функціональними частинами молекул цих пептидів є дуже схожі праві області. Однак пептиди володіють прямо протилежними поведінковими властивостями: гастрин викликають у людини відчуття голоду, а холецистокинином - ситості. Мабуть, дане відмінність обумовлена ??тим, що в первинній послідовності холецистокинином положення залишку тирозину Y зрушено на один крок в порівнянні з гастрину. На тому ж малюнку наведена первинна структура пептиду ціоніна, отриманого з представника найпростіших хордових Ciona intestinalis (рис. 12). Його структура гомологична і гастрин, і холецистокінін і характеризується двома залишками тирозину, що знаходяться в тих же положеннях, що і у обох зазначених пептидів. На жаль, функціональні властивості його не вивчені. А при належному експериментальному дослідженні можна було б відповісти на питання, яка роль хімічної структури в цілому і залишків тирозину зокрема при прояві протилежних фізіологічних ефектів.

Рис. 11. Первинні структури представників пептідома людини в порівнянні зі структурою одного з пептидів оболочечніка

Рис. 12. Оболочечнік Ciona intestinalis, що мешкає в Північному морі

Інший приклад: на рис. 13 наведені амінокислотні послідовності дуже схожих молекул, які також об'єднані в структурно-гомологичное сімейство. Ці молекули виявлені у вельми еволюційно далеких живих організмів - від комах до ссавців. У першому рядку дана первинна структура брадикинина, що містить 9 амінокислотних залишків і зустрічається у багатьох вищих організмів, у тому числі і в людини. Протягом багатьох років хіміки синтезували різні неприродні аналоги цієї молекули, щоб відповісти на питання, якою її ділянку відповідальний за взаємодію з рецептором. Близько 30 років тому були навіть синтезовані всі можливі фрагменти брадикинина - 8 дипептидов, 7 тріпептідов і т.д. (Всього можливі 36 фрагментів), величину активності яких потім випробовували в одному і тому ж біологічному тесті. Результат виявився тривіальним: з'ясувалося, що максимальну активність проявляє лише вся молекула цілком, а кожен фрагмент окремо володіє або слідової активністю, або нульовий. Цю трудомістку роботу не довелося б робити, якби в той час були відомі інші брадикініни, наведені на рис. 13, і засобами біоінформатики вони були б виділені з глобального протеома. Представлене структурно-гомологичное сімейство наочно демонструє, що у всіх молекул є область, яка в результаті біологічної еволюції практично не змінювалася (квазіконсерватівная область), і вона являє собою молекулу брадикинина вищих живих організмів, відібрану як найбільш досконалу в результаті еволюційного процесу. Даний приклад демонструє, що протеоміка разом з біоінформатики дозволяє швидко (і дешево) вирішувати принципові наукові проблеми.

Рис. 13. Первинні структури природних пептидів брадикининов, отриманих з різних живих організмів. Жирним шрифтом вказані квазіконсерватівние області

Рис. 14. Первинні структури структурно-гомологичного сімейства ендотеліну / токсинів

І, нарешті, третій приклад - структурно-гомологичное сімейство ендотеліну ссавців і токсинів змій (рис. 14). Незважаючи на разючу подібність структур, їх функціональні властивості разюче відрізняються один від одного: одні є дуже корисними регуляторами судинного скорочення, а інші - смертельно небезпечні для життя. У даному випадку ми стикаємося з ситуацією, коли первинна структура не несе достатньої інформації, здатної пояснити причину відмінності функцій, і необхідно більш детальний розгляд просторової (третинної) структури. На рис. 15 і 16 показані просторові структури двох представників цього сімейства - ендотеліну-1 і сарафотоксіна 6b, отримані за допомогою ЯМР-спектроскопії. На малюнках вони повернені так, щоб досягти максимальної просторової гомології. Але повної гомології вдасться отримати ні при якому повороті. Отже, незважаючи на велику схожість первинних структур, взаємодія їх здійснюється з різними рецепторними структурами, а тому і призводить до різних фізіологічним ефектам.

Рис. 15. Просторова структура сосудосокращающего пептиду ендотеліну-1 людини

Рис. 16. Просторова структура сарафотоксіна 6b ізраїльської змії Atractaspis engaddesis

Звичайно настільки приватними прикладами неможливо повністю охарактеризувати різноманіття функціональної протеоміки. Створення уявлень про величезну мережі взаємодій білкових та інших молекул в організмі вимагає величезної праці та застосування всіх засобів сучасної біоінформатики. По суті, створення таких уявлень ще тільки починається. Однак є підстави вважати, що з кожним роком наші пізнання в цій галузі будуть швидко рости.

Рис. 17. Загальні контури карти метаболізму карбонових кислот [12]

Одним з перших успіхів на цьому шляху є створення карти метаболізму карбонових кислот в Інституті біохімії ім. А.Н. Баха Російської академії наук (рис. 17). Ця карта являє собою мережу реакцій з регулярним періодичним будовою. Такий підхід виявився успішним з огляду на те, що функціонально аналогічні метаболіти зазнають подібні біохімічні перетворення, утворюючи функціонально аналогічні похідні. У карті по вертикалі розташовані області, що містять сполуки з однаковим числом атомів вуглецю (від 1 до 10), а горизонтальні ряди являють собою ряди функціонально аналогічних метаболітів. Хімічні структури на карті з'єднані численними стрілками із зазначенням, які ферменти (білки) беруть участь у відповідних хімічних перетвореннях. Чи не правда, такий підхід нагадує періодичну систему хімічних елементів Д.І. Менделєєва? І так само, як і менделєєвськая система, дана карта має прогностичної силою. З її допомогою був передбачений цілий ряд нових ферментів, які згодом були виявлені експериментально.

Подібні схеми можуть бути поширені і на інші метаболічні процеси (наприклад, вуглеводів, амінокислот і т.д.), а також використані для пошуку нових метаболітів біохімічних реакцій.

Таким чином, функціональна протеоміка займається вивченням складних взаємозв'язків структури і функцій протеома.

Практична протеоміка

Отже, головним завданням протеоміки є виявлення механізму взаємодії величезного числа білків і пептидів в одному організмі. Яка практична значущість цієї грандіозної і дорогої роботи? Очевидно, що в першу чергу в результатах такої роботи зацікавлені фармакологи і медики, оскільки дуже часто простежується тісний зв'язок між змінами в білковому складі і хворобливим станом людини. Тому нові дані в протеоміці будуть використовуватися (і вже використовуються) для швидкої розробки нових лікарських засобів та новітніх методів лікування хвороб, з якими медицина боролася століттями. На сьогоднішній день 95% всіх фармакологічних засобів впливають на білки. Протеоміка зі своїм системним підходом може допомогти ідентифікувати і оцінити важливість появи нових білків набагато ефективніше, що, в свою чергу, прискорить розробку нових діагностичних тестів і терапевтичних засобів.

Перше практичне застосування протеомних досліджень відбулося задовго до появи терміну «протеоміка», ще на початку XX ст., Коли була виявлена ??роль інсуліну в розвитку такого важкого захворювання, як діабет. Створення інсулінових препаратів врятувало життя мільйонам людей.

У теперішній же час протеоміка, разом з геноміки та біоінформатики, орієнтована на створення нових лікарських препаратів (рис. 18), в яких молекулярними мішенями будуть служити ті чи інші білки [13]. Процес знаходження нових мішеней для дії ліків вирішується за допомогою біоінформатики, причому об'єктом аналізу є геном. Однак після аналізу генома необхідно отримати докази того, що даний білок інтенсивно експресується і знаходиться в клітці в робочому стані. Це завдання вирішує протеоміка. Таким чином виявляється молекулярна генетична мішень для ліків.

Рис. 18. Взаємозв'язок геноміки, протеоміки та біоінформатики при вирішенні проблеми конструювання нових лікарських засобів

Слід зазначити, що протеоміка може і сама по собі вирішувати проблему знаходження мішені. Якщо отримати протеомні карти (подібні тим, що представлені на рис. 3 або 4) нормальних і патологічних тканин, то за відмінностей в них можна встановити, які білки важливі для розвитку того чи іншого патологічного стану, і вибрати їх в якості мішеней або використовувати ці знання для діагностики. Можна припустити, що в майбутньому до звичайного аналізу крові додасться створення протеомних карт крові. Для цього в поліклініках необхідно буде використовувати спеціальне обладнання, за допомогою якого у пацієнтів періодично будуть брати кров. При виникненні хворобливого стану протеомних карту хворої людини потрібно буде всього лише порівняти з його ж протеомних картою, але складеної в той час, коли він був здоровий, і можна буде виявити зміни, що відбулися в білковому складі крові і визначити причину захворювання. Подібне порівняння протеома пухлинних і нормальних клітин, клітин до і після впливу певних факторів (наприклад, фізичних чи хімічних), використання біологічних рідин в діагностичних цілях - все це представляє величезний інтерес і відкриває абсолютно нові перспективи для медицини, ветеринарії, фармакології, харчовій промисловості та інших прикладних областей. Попереду чекає величезна і цікава робота.

Список літератури

1. Sanger F., Air G.M., Barrell B.G., Brown N.L. et al. Nucliotide sequence of bacteriophage phi X-174 DNA .// Nature. 1977. V. 265, № 5596. P. 687-695.

2. Fleischmann R.D., Adams M.D., White O. et al. Whole-genome random sequencing and assembly of Haemophilus influenzae Rd .// Science. 1995. V. 269, № 5223. P. 496-512.

3. Nature. 2001. 409, № 6822 (більша частина випуску журналу присвячена розшифровці генома людини).

4. Ferguson-Smith A.C., Ruddle F.H. The genomics of human homeobox-containing loci .// Pathol. Immunopathol. Res. 1988. V. 7, № 1-2. P. 119-126.

5. Franklin J. Bioinformatics changing the face of information .// Ann. NY Acad. Sci. 1993. V. 700. P. 145-152.

6. Wasinger VC, Cordwell SJ, Cerpa-Poljak A. et al. Progress with gene-product mapping of the Mollicutes: Mycoplasma genitalium .// Electrophoresis. 1995. V. 16, № 7. P. 1090-1094.

7. Замятнін А.А. Блискучий світ білків і пептидів .// Біологія. 2002. № 25-26. P. 8-13.

8. Gorg A., Weiss W., Dunn M.J. Current two-dimensional electrophoresis technology for proteomics .// Proteomics. 2004. V. 4, № 12. P. 3665-3685.

9. Ramstrom M., Bergquist J. Miniaturized proteomics and peptidomics using capillary liquid separation and high resolution mass spectrometry .// FEBS Lett. 2004. V. 567, № 1. P. 92-95.

10. http://au.expasy.org/sprot/

11. http://erop.inbi.ras.ru/

12. Малигін А.Г. Метаболізм карбонових кислот (періодична схема). - М .: «Міжнародна програма освіти», 1999.

13. Арчаков А.И. Що за геномікою? - Протеоміка .// Вопр. мед. хімії. 2000. Т. 46, № 4. С. 335-343.

Для підготовки даної роботи були використані матеріали з сайту http://bio.1september.ru

Авіація і космонавтика
Автоматизація та управління
Архітектура
Астрологія
Астрономія
Банківська справа
Безпека життєдіяльності
Біографії
Біологія
Біологія і хімія
Біржова справа
Ботаніка та сільське господарство
Валютні відносини
Ветеринарія
Військова кафедра
Географія
Геодезія
Геологія
Діловодство
Гроші та кредит
Природознавство
Журналістика
Зарубіжна література
Зоологія
Видавнича справа та поліграфія
Інвестиції
Інформатика
Історія
Історія техніки
Комунікації і зв'язок
Косметологія
Короткий зміст творів
Криміналістика
Кримінологія
Криптологія
Кулінарія
Культура і мистецтво
Культурологія
Логіка
Логістика
Маркетинг
Математика
Медицина, здоров'я
Медичні науки
Менеджмент
Металургія
Музика
Наука і техніка
Нарисна геометрія
Фільми онлайн
Педагогіка
Підприємництво
Промисловість, виробництво
Психологія
Психологія, педагогіка
Радіоелектроніка
Реклама
Релігія і міфологія
Риторика
Різне
Сексологія
Соціологія
Статистика
Страхування
Будівельні науки
Будівництво
Схемотехніка
Теорія організації
Теплотехніка
Технологія
Товарознавство
Транспорт
Туризм
Управління
Керуючі науки
Фізика
Фізкультура і спорт
Філософія
Фінансові науки
Фінанси
Фотографія
Хімія
Цифрові пристрої
Екологія
Економіка
Економіко-математичне моделювання
Економічна географія
Економічна теорія
Етика

8ref.com

© 8ref.com - українські реферати


енциклопедія  бефстроганов  рагу  оселедець  солянка