трусики женские украина

На головну

Робота іонних насосів - Біологія

Робота іонних насосів

Коли м'яз скорочується, то на це тратиться енергія. Це ясне. Одним з показників витрати енергії є споживання кисня. Але виявляється, що кисень споживається і м'язом, що покоїться або нервом. У 1932 р. М. Березіна, що працювала в лабораторії англійського біофізика А. Хилла, показала, наприклад, що нерв краба в спокої споживає 50% тих кількості кисня, які потрібно йому при посиленій роботі. У зв'язку з цими даними Хилл писав: «Таким чином, нічого не роблячи, а просто знаходячись в стані готовності до відповіді, нерв споживає біля половини тієї енергії, яку він використовує при максимальній відповіді». Зараз достовірно відомо, що ця енергія в основному витрачається га підтримка іонних концентрацій, а отже, і на підтримку потенціалу спокою.

Нагадаємо, що ПП в основному створюється за рахунок різниці концентрацій калію всередині клітки, де його багато, і поза кліткою, де його мало. Але мембрана проникна, хоч і в невеликій мірі, також і для іонів натрію. Іони натрію повинні проникати всередину клітки по градієнту потенціалу, а назовні замість них повинні вийти іони калію. За рахунок цього процесу ПП повинен поступово знижуватися. Однак в живих організмах цього ие відбувається. Існує якийсь механізм, який весь час підтримує ПП, а значить і різниця концентрацій калію всередині і поза кліткою. Цей механізм повинен переміщувати іони калію всередину клітки, тобто туди, де їх концентрація вище, ніж зовні, а такі переміщення проти градієнта концентрації вимагають витрати енергії.

Непрямі дані, що показують, що енергія нерва, що покоїться затрачується на підтримку ПП, були отримані ще в 30-роки, коли Р. Джерард показав, що величина ПП в нервовому волокні прямо залежить від вмісту кисня в омиваючій волокно середі.

Вивчення механізму підтримки іонної концентрації є однією з важливих задач биоэнергетики - розділу молекулярної біології. Биоэнергетика, яка вивчає, звідки жива клітка отримує енергію і на що її тратить, виявилася найтіснішим образом пов'язаної з электробиологией. Які ж молекулярні механізми підтримки іонних концентрацій?

Ми вже говорили, що в зовнішню клітинну мембрану вбудовані різного роду білкові молекули. Виявляється, деякі з цих молекул грають роль своєрідних насосів, «захитати» іони калію всередину клітки і викачуючи іони натрію назовні. Вони так і називаються - «іонні насоси». Ці білки, дуже складно влаштовані, являють собою справжню молекулярну машину, що уміє робити дивні речі. Наприклад, показано, що вона має два активних центри, одним з яких може захоплювати іон калію, а іншим - натрію. Знайдено також і «паливо», на якому працює ця машина. Ця особлива хімічна сполука - аденозинтрифосфорная кислота. Відомий також «коефіцієнт корисної дії» цього палива: досліди з радіоактивними ізотопами показали, що енергії розпаду однієї молекули АТФ досить для викачування назовні трьох іонів натрію і захитати всередину клітки двох іонів калію. Як працює ця молекулярна машина, точно не відомо, але можна уявити собі, наприклад, таку схему. Захопивши одним активним центром із зовнішньої середи іон калію, а іншим - з внутрішньої - іон натрію, вона, споживаючи АТФ, повертається всередині мембрани на 180°. Іон натрію виявляється поза кліткою і там відділяється, а іон калію попадає всередину і також звільняється, після чого молекула білка приймає початкове положення і все починається спочатку. Цей білок, відкритий в 1957 р. С. Скоу, звичайно називають натрий-калиевым насосом.

Якщо припинити подачу кисня до клітки, то в ній через деякий час зникає АТФ і припиняється перекачка калію і натрію; тоді різниці концентрацій починають вирівнюватися і ПП починає падати. Якщо в таку клітку ввести АТФ, то насос поновлює роботу і ПП відновлюється. Це і пояснює досліди Дже-рарда.

Ми знаємо, що процеси в організмі регулюються. Серце бігуна б'ється утроє частіше, ніж у спокійно сидячої людини. Робота серця регулюється нервовою системою. А чи можна якось регулювати роботу молекули, управляти молекулярною машиною?

Виявилося, що робота іонних насосів керується концентрацією іонів всередині клітки і поза нею. При цьому робота насоса прискорюється надлишком іонів калію зовні клітки або надлишком іонів натрію всередині клітки.

Оскільки натрий-калиевый насос викачує назовні більше іонів натрію, ніж захитає всередину іонів калію, він міняє не тільки концентрацію цих іонів, але і мембранный потенціал. Тому натрий-калиевый насос називають электрогенным насосом. У кожному циклі роботи насос викидає назовні зайвий іон натрію і тим самим гиперполяризует мембрану. Після одного або декількох ПД в клітці виявляється надлишок Ка+; це активує роботу насоса. Інтенсивно викачуючи натрій, насос може помітно гиперполяризовать мембрану: МП може на 20 мВ перевищувати ПП за рахунок роботи насоса. Таким чином, насоси не тільки впливають на концентрації іонів, але можуть бути і джерелами помітної різниці потенціалів.

Ми з вами коротко ознайомилися з роботою одного з мембранных білків - натрий-калиевого насоса. Надалі нам доведеться говорити про багато які інші мембранные білки. Але одне важливе зауваження можна зробити вже після цього першого прикладу. Досі ми розглядали такі процеси, які протікали абсолютно однаково і в фізичних, і в біологічних системах. ПП виникає абсолютно однаково і на полупроницаемой мембрані нервового волокна, і на полупроницаемой стінці глиняної трубки. Тепер ми в перший раз зіткнулися з таким явищем, яке не зустрічається в фізиці, оскільки воно є результатом біологічної еволюції. Це машина, розміром всього в одну молекулу, перекачувальна іони через мембрану. Робота цієї машини може регулюватися як постачанням енергії, так і ситуацією в навколишньому середовищі. З різними молекулярними машинами ми неодноразово зустрінемося надалі.

Які ще бувають насоси?

Найважливішу роль в здійсненні самих різних клітинних функцій грає іон кальцію. У спокої всередині клітки дуже мало іонів вільного кальцію в порівнянні з навколишнім середовищем - всього 10~7- 10~емоля. Під впливом тих або інакших впливів кальцій може попасти в клітку, але потім повинен бути видалений з цитоплазмы. Якщо висока концентрація кальцію в клітці не усувається, клітка через деякий час гине, Тому клітки дуже ретельно стежать за внутрішньоклітинною концентрацією кальцію. У клітинній мембрані є спеціальний кальцієвий насос, що викачує іони кальцію в зовнішню середу. Цей насос электронейтрален: він обмінює іон кальцію на два протони.

У особливому положенні знаходяться мышечные клітки. Для мышечного скорочення необхідно багато іонів кальцію, і його треба доставляти до кожної з білкових фибрилл, пронизливих все тіло клітки *). Його треба швидко доставляти, а потім так само швидко прибирати від фибрилл, щоб м'яз міг розслабитися. Якби кальцій поступав і віддалявся через зовнішню мембрану клітки, таке швидке його переміщення було б неможливим. Мышечные клітки знайшли вихід із становища. Всередині них є розгалужена система порожнин і трубочок» освічених спеціальною внутрішньою мембраною. У цих порожнинах і зберігається кальцій, туди ж він забирається для розслаблення м'яза. Вся ця внутрішня мембрана густо покрита молекулами - молекулами кальцієвого насоса. Концентрація кальцію в порожнинах в розслабленому м'язі в тисячі разів вище, ніж в інших частинах клітки. Робота насоса обходиться клітці недешево: на перенесення двох іонів кальцію насос витрачає одну молекулу АТФ.

На цьому прикладі ми бачимо, що молекулярні машипи можуть працювати не тільки на зовнішній мембрані клітки, але і на її внутрішніх мембранах.

Протонна помпа

Іонні насоси є не тільки в клітках тваринних. Наприклад, у гриба нейроспоры виявлений электрогенный іонний насос, який працює на енергії АТФ і може створювати на мембрані гриба різницю потенціалів в 200 мВ за рахунок енергійного викачування протонів з клітки. У галобактерий виявлений протонний насос, працюючий на енергії світла. Цікаво, що білок, створюючий цей насос, вельми схожий по будові з родопсином рецепторов сітчатки.

А тепер зверніть увагу на те, як далеко ми раптом пішли від нервового волокна або м'яза, з якими працювали і Гальвані, і Дюбуа-Реймон, і покоління інших электрофизиологов. Раптом мова пішла про бактерії і гриби, а могла з таким же успіхом піти і про клітки рослин.

У біології дуже важливо порівнювати між собою різні об'єкти, щоб уберегтися від помилкових висновків, перенесення властивостей однієї тварини на весь органічний світ. І що ж показало таке порівняльне вивчення? Виявилося, що всі клітки мають ПП! Причому у різних кліток він може створюватися різними способами: в нервовому волокні - за рахунок градієнта концентрації калію, а у гриба нейроспоры - за рахунок роботи протонної помпи.

Ми знаємо, що у нервових і мышечных кліток їх мембранный потенціал якось використовується для передачі сигналів і скорочення. Але навіщо потрібен ПП кліткам бактерій або грибів?

Навіщо незбудливим кліткам потенціал спокою?

Повернемося на минутку до кліток тварин. Адже і у тварин крім нервів і м'язів є і клітки печінки, і клітки желудкаАи клітки шкіри. Навіщо потрібен ним ПП?

Досі, коли ми говорили про рух речовин через клітинну мембрану, ми в основному розглядали або воду, або іони. Але всім кліткам необхідно отримувати живлячі речовини, наприклад цукру, або амінокислоти для побудови клітинних білків. Самі по собі ці речовини дуже погано проходять через липидные плівки. Як же вони попадають в клітки? Виявилося, що, як правило, вони проходять всередину кліток тоді, коли на клітинній мембрані є потенціал, а в навколишньому середовищі - іони натрію. Чому?

Тут ми стикаємося з новим класом молекулярних машин белков-переносчиков і з явищем електричного транспорту. Ці білки приєднують до себе на зовнішній частині мембрани молекулу і іон натрію, придбаваючи позитивний заряд. Тоді електричне поле втягує переносчик до внутрішньої поверхні мембрани, де він відділяє цукор і натрій. Потім белок-переносчик знову проходить через рідку липидную мембрану на поверхню, де захоплює нові молекули цукру і натрій. Зайвий натрій, який попадає всередину клітки, відкачується назовні натрієвим насосом.

Отже, тепер ми розуміємо, що могутнє електричне поле в мембрані створюється не даремно: клітка, що володіє ПП, може ефективно втягувати всередину позитивно заряджені молекули або комплекси молекул. Молекула цукру сама по собі не несе заряд, а переносчик не приєднує іон натрію, поки цукор не поміститься свою. Можна сказати, що переносчик грає роль карети, цукор - седока, а натрій - роль конячки, хоч він не сам спричиняє рух, а його втягує в клітку електричне поле. Для поглинання з середи різного Цукру або різних амінокислот клітка має і різні белки-переносчики. Переносчики у бактерій доставляють в клітку цукор не з іоном натрію, а з іоном водня.

Таким чином, мембранный потенціал використовується всіма клітками для електричного транспорту різних речовин.

Електричний транспорт може бути використаний і для видалення деяких речовин з клітки. Приведемо приклад. Ми вже говорили, що надлишок кальцію в клітці небезпечний для неї. Якщо кальцію в клітку попало багато і кальцієвий насос не справляється з його видаленням, включається особлива аварійна система і в справу вступає белок-переносчик. Він приєднує всередині іон кальцію, а зовні - три іони натрію і переносить кальцій назовні, а натрій - всередину клітки. На відміну від натрий-калиевого насоса, який використовує енергію АТФ, цей кальцієвий переносчик працює як електромотор, використовуючи енергію мембранного потенціалу. Правда, при кожному циклі роботи всередину клітки тут попадають три іони натрію, але це не так страшне, як попадання іонів кальцію.

Все розказане нами наводить на думку, що нервові клітки, декілька модифікувавши свою мембрану, використали мембранный потенціал, властивий будь-якій живій клітці, для виконання нової функції - передачі сигналів. Те, що служиво для транспорту речовин, стало служити для передачі інформації. Такий спосіб еволюції називається «зміна функцій»; він був відкритий ще Дар-віном і детально розроблений майже сто років назад німецьким зоологом А. Дорном.

Як організми використовують свої іонні насоси

Успіхи молекулярної біології часто дозволяють зрозуміти процеси, що відбуваються на клітинному і навіть на органному рівні. Так. відкриття іонних насосів дозволило біологам абсолютно інакше уявити собі роботу цілого ряду органів тварин або виконання клітинних функцій. Ми розглянемо лише декілька прикладів такого нового розуміння,

Є тварини, які п'ють тільки морську воду9папример альбатроси. Спеціальні залози, клітки яких забезпечені іонними насосами, виділяють назовні зайву сіль. Залози з такими ж функціями є і у деяких рослин, зростаючих на засолених грунтах.

Цікаво, що «опреснители» існують і у морських риб. Справа в тому, що їх кров менш солона, ніж навколишнє середовище, тому внаслідок осмоса вода «витягується» з тіла риби через зябра. Доводиться пити багато води, але з нею в організм попадає зайва сіль. Ця сіль викачується назовні іонними насосами, які розташовані в мембрані кліток тих же жабер.

А у прісноводних риб або жаб вода, навпаки, поступає в тіло, розбавляючи внутрішню середу. Тому у цих риб насоси жабер, а у жаб іонні насоси шкіри ловлять різноманітні іони в навколишньому середовищі і перекачують їх всередину організму. Роботу такого электрогенного насоса колись і вдалося зареєструвати Дюбуа-Реймону на шкірі жаби.

З іонними насосами пов'язана робота органів травлення і виділення різних тварин, вони беруть участь у всмоктуванні продуктів травлення, виділенні відходів метаболізму і інш. У спеціальних клітках шлунка хребетних є протонна помпа. Вона викачує в просвіт шлунка позитивно заряджені іони водня, за якими йдуть негативні іони хлора; так в шлунку виробляється соляна кислота.

Розглянемо ще роботу кишечника людини і інших хребетних. Коли їжа в кишечнику руйнується травними ферментами, там виникає дуже багато молекул, які створювали б величезний осмотическое тиск. У передні відділи кишечника весь час поступає вода так, щоб підтримувався такий же осмотическое тиск, як в плазмі крові. Разом з водою в двенадцатиперстную кишку поступають іони натрію і хлора. У тонкому кишечнику натрій разом з молекулами Цукру і амінокислот захоплюється молекулами-переносчиками. Це створює різницю потенціалів на епітелії тонкого кишечника, а різниця потенціалів спричиняє рух іонів хлора. У результаті в кров повертаються натрій і хлор, а також цукор і амінокислоти. Услід за цими речовинами по законах осмоса йде всмоктування води. За добу з кишечника всмоктується в кров приблизно 10 літрів води, це більше^ ніж вся кількість крові в організмі. Таким чином, кишечник працює за рахунок «кругообігу води», а також іонів натрію і хлора.

Отже, іонні насоси обслуговують самі різні функції організму: постачання кліток їжею, підтримка сольового складу внутрішньої середи організму, регуляция осмотических процесів; іонні насоси дозволяють рослинам поглинати воду і солі з грунту, твариною - пити тільки морську воду і т.д. Створення високої концентрації калію і пов'язаного з нею ПП в збудливих тканинах - нервах і м'язах - лише невелика побічна гілочка в цих різноманітних і важливих електричних процесах.

Іонні канали

Мембранная теорія, про яку було розказано в гл. 4, пояснивши ряд класичних експериментальних даних, поставила перед біологами цілий ряд нових питань. Чим зумовлена проникність мембрани для іонів калію і натрію? Яким способом мембранный потенціал міняє проникність мембрани? Які процеси лежать в основі рівнянь Ходжкина - Хакслі?

Ви вже знаєте, що провідність клітинних мембран в основному визначається білками, що містяться в них, створюючими в мембрані «пори», через які можуть пройти невеликі молекули. Ті часи, через які проходять іони калію, назвали калиевыми іонними каналами, а ті, через які проходять іони натрію, - натрієвими іонними каналами.

Іонні канали освічені особливим класом білкових молекул. Ці молекули уміють відрізняти «свої» іони, відкривають або закривають шлях для іонів під дією потенціалу на мембрані і т.д. Таким чином, цьому ще один клас білкових машин, так же важливих, як і іонні насоси.

На початку 70-х років англійський биофизик Б. Хилле досліджував проходження через натрієві і калиевые канали іонів різного розміру. Іони, які мали розмір більше критичного, не проходили через даний канал. Хилле з'ясував, що діаметр калиевого каналу рівний приблизно 0,3 нм, а у натрієвого каналу - трохи більше. На основі ряду таких дослідів склалося наступне наближене уявлення про іонні канали,

Іонний канал можна уявити собі як трубку певного діаметра, перетинаючу мембрану. На одному кінці така трубка має «заслонку» або «ворота», положенням яких управляє потенціал. Заслонка заряджена і тому при зміні потенціалу може відкривати вхід в канал. Інакшими словами, вважається, що ворота каналів являють собою якусь заряджену групу атомів, яка може зміщатися в електричному полі, відкриваючи при цьому дорогу для іонів калію або натрію. Зміщення такої зарядженої групи в молекулі білка повинно реєструватися у вигляді короткочасного невеликого електричного струму. І дійсно, в 1973 р. Р. Кейнесу і Е. Рохасу вдалося зареєструвати цей струм в натрієвих каналах. Щоб більш сильний струм натрію не замаскував цей слабий воротный струм, натрієві канали під час дослідів були заблоковані тетродотоксином.

При вивченні натрієвих каналів було показано, що ворота і механізм инактивации розташовані в різних дільницях каналу. Фермент проназа, введений всередину гігантського аксона кальмара, «відкушує» частину натрієвого каналу, що стирчить з мембрани. Після такої процедури канал продовжує відкривати ворота під дією деполяризація але не инактивируется. Таким чином, прогноз моделі X-X про наявність двох відособлених процесів - активації і инактивации - отримало чітке експериментальне підтвердження.

Вдалося визначити також густину натрієвих каналів в мембрані. Це було зроблене різними способами. Так, Хилле, який оцінив діаметри каналів, розрахував, який опір повинен мати один такий канал, і набув значення порядку 1010Ом. Знаючи питомий опір мембрани, можна знайти густину каналів. Інший метод полягав в тому, що визначалося число молекул тетродотоксина, необхідне для повної блокади натрієвої провідності. Обидва методи дали дуже близькі результати. Виявилося, що на квадратному мікрометрі мембрани знаходяться усього декілька десятків каналів. Це дуже мале, якщо врахувати, що на тій же площі розташовуються декілька мільйонів молекул липидов. «Молекулярне сито» виявилося схожим на решето, в якому пробито усього декілька дірочок.

Спочатку думали, що існують усього два типи іонних каналів - калиевые і натрієві, але виявилося, що це не так. Наприклад, були відкриті кальцієві канали. Спочатку їх виявили у прісноводних тварин - інфузорій і молюсків. Це здавалося природним: в прісній воді звичайно більше іонів кальцію, ніж натрію. Однак надалі виявилося, що кальцієві канали є і у хребетних тварин. Виявилося також^ що і самі натрієві канали влаштовані не всі однаково. Наприклад, в клітках серця ембріонів ссавців виявлені натрієві канали, які не блокуються тетродотоксином. По мірі дозрівання організму ці канали замінюються іншими - тетродочувствительными. Калиевых каналів також виявилося багато сортів. Потім були відкриті хлорні канали і т.д. Зрештою, каналів наоткрывали майже стільки ж, скільки елементарних частинок. У одній і тій же клітці серця є багато різних сортів іонних каналів і відкриваються всі нові.

Розвиток методик дозволив перейти до вивчення властивостей окремих каналів. Для цього микроэлектрод не вводять в мембрану, а щільно притискують до неї. Оскільки канали розташовані далеко один від одного, вдається так притиснути електрод, що під ним знаходиться усього один канал. У таких роботах вдається отримати відповіді, наприклад, на таке питання, скільки станів є у каналу: «відкрито» і «закрито» або ще якісь? У цих роботах було виявлено, що поведінка одиночного каналу є ймовірностний. При даному рівні мембранного потенціалу у каналу є певна імовірність відкритися на деякий час. При іншому рівні ПП ця імовірність міняється.

Тепер ми можемо обговорити таке питання: чим визначається, наприклад, зростання мембранной проникності калію від часу при стрибку мембранного потенціалу? Якби всі канали були однаковими і детермінований керувалися б електричним полем на мембрані, то поступової зміни проникності не спостерігалося б - вона мінялася б стрибком. Тоді всі процеси збудження протікали б абсолютно інакше. Плавну зміну проникності можна пояснити або присутністю в мембрані каналів різного сорту з різною чутливістю до МП, або ймовірностний характером роботи каналів, який і був виявлений експериментаторами.

Таким чином, рівняння Ходжкина - Хакслі - це такі ж макроскопічні рівняння, як рівняння Менделеєва - Клапейрона. І як за рівнянням газового стану стоять молекулярно-кінетична теорія і статистична фізика, так і за рівняннями X-X сюїт статистична фізика каналів, яка зараз енергійно розвивається.

Інші сучасні напрями молекулярної біології - це вивчення пристрою одиночних молекулярних машин, їх деталей і їх взаємодії, з'ясування того, які атомні групи грають роль воріт і т.д. І, нарешті, ще один напрям - генетика іонних каналів.

Якщо ще недавно передбачається, що іонний канал - це стабільна машина, яка вбудовується в мембрану н функціонує досить довго, то тепер з'ясувалося, що білки-канали нервових кліток функціонують усього біля діб, а потім руйнуються і на їх місце доставляються нові канали. Синтезуються ці канальні білки, як і інші білки, спеціальними молекулярними машинами - рибосомами. «Команду», який саме білок синтезувати, рибосомы отримують від особливих молекул - молекул інформаційної рибонуклеиновой кислоти. Англійському біологу Міледі вдалося поставити такий красивий досвід. Він виділив з нервових кліток молекули РНК і ввів їх в яйцеклетку. У нормі ці яйцеклетки незбудливі, тобто не реагують на деполяризація ПД. Однак ті яйцеклетки, в які ввели РНК нейронів, придбали збудливість і стали відповідати на роздратування такими ж імпульсами, як нервові клітки. Це означає, що по РНК нейронів на рибосомах яйцеклеток були синтезовані білки іонних каналів, ці білки зуміли вбудуватися в мембрану яйцеклетки і нормально в ній працювали.

Було виявлено, що в мотонейронах хребетних на тілі клітки в основному знаходяться натрієві канали, а на дендритах - кальцієві. Такий же розподіл каналів виявили і на клітках Пуркинье - великих нейронах мозочка. Це означає, що білки-канали, що виробляються кліткою, не просто вбудовуються в мембрану нейрона де попало, а канали різного сорту транспортуються в потрібне місце.

Досі мова йшла про канали, які відкриваються і закриваються під дією електричного поля на мембрані. Однак існують і канали абсолютно інакшого сорту, які керуються хімічними речовинами. Вже давно були відомі канали постсинаптической мембрани, які відкриваються під дією медіатора. Але зараз з'ясовано, що схожими властивостями володіють і канали, що не мають відношення до синапсам, причому вони можуть реагувати не на речовини, що поступають до зовнішньої поверхні клітки ззовні, а на ті речовини, які виробляються всередині клітки або нагромаджуються в ній.

Наприклад, існують кальцієві канали, позбавлені инактивации. При деполяризація мембрани через них в клітку весь час поступає потік іонів кальцію. Якщо концентрація кальцію в клітці досягає деякого досить високого рівня, то канал закривається. Ці канали можна закрити і за допомогою електричного поля, гиперполяризуя мембрану; таким чином, це канали, так би мовити, «двійчастого підкорення». Виявлені і калиевые канали, керовані концентрацією кальцію.

Для інших кальцієвих каналів показано, що вони чутливі до концентрації особливої речовини цАМФ. Ця речовина управляє рядом внутрішньоклітинних процесів. Зростання концентрації цАМФ в деяких нейронах приводить до відкривання каналів і деполяризація клітки. Одним з перших такі канали виявив радянський биофизик Е.А. Ліберман.

Таким чином, в останні роки стало ясно, що є багато типів каналів, що канали - це динамічні освіти і, нарешті, що існує багато механізмів, керуючих роботою каналів: це і електричні поля на мембрані, і різні хімічні речовини.

У кожній клітці є гени, відповідальні за білки-канали, але в одних клітках ці гени неактивні, а в інших вони функціонують. Так електричні процеси в клітці виявляються пов'язаними з роботою її генетичного апарату. Клітка може не тільки управляти роботою каналів зсередини, вона може і модифікувати їх, міняти їх властивості за допомогою біохімічних реакцій. Такі процеси відбуваються наприклад, при навчанні тварини.

Авіація і космонавтика
Автоматизація та управління
Архітектура
Астрологія
Астрономія
Банківська справа
Безпека життєдіяльності
Біографії
Біологія
Біологія і хімія
Біржова справа
Ботаніка та сільське господарство
Валютні відносини
Ветеринарія
Військова кафедра
Географія
Геодезія
Геологія
Діловодство
Гроші та кредит
Природознавство
Журналістика
Зарубіжна література
Зоологія
Видавнича справа та поліграфія
Інвестиції
Інформатика
Історія
Історія техніки
Комунікації і зв'язок
Косметологія
Короткий зміст творів
Криміналістика
Кримінологія
Криптологія
Кулінарія
Культура і мистецтво
Культурологія
Логіка
Логістика
Маркетинг
Математика
Медицина, здоров'я
Медичні науки
Менеджмент
Металургія
Музика
Наука і техніка
Нарисна геометрія
Фільми онлайн
Педагогіка
Підприємництво
Промисловість, виробництво
Психологія
Психологія, педагогіка
Радіоелектроніка
Реклама
Релігія і міфологія
Риторика
Різне
Сексологія
Соціологія
Статистика
Страхування
Будівельні науки
Будівництво
Схемотехніка
Теорія організації
Теплотехніка
Технологія
Товарознавство
Транспорт
Туризм
Управління
Керуючі науки
Фізика
Фізкультура і спорт
Філософія
Фінансові науки
Фінанси
Фотографія
Хімія
Цифрові пристрої
Екологія
Економіка
Економіко-математичне моделювання
Економічна географія
Економічна теорія
Етика

8ref.com

© 8ref.com - українські реферати


енциклопедія  бефстроганов  рагу  оселедець  солянка